反相液相色谱对多肽的分离_纯化与制备.pdf

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 9 期 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 2002 年 9 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1126～1129 反相液相色谱对多肽的分离 、纯化与制备 白　泉 　葛小娟　耿信笃 (西北大学现代分离科学研究所 ,现代分离科学陕西省重点实验室 ,西安 710069) ( ) 摘 　要 　用反相高效液相色谱 RPLC 对两种化学合成多肽 ———32 肽和 21 肽进行了分离、纯化和制备。在用 分析型 RPLC 色谱柱对多肽样品的制备过程中 ,对其进样量和洗脱梯度进行了选择。每次进样量为 5mg ,在最 优化色谱条件下 ,用 RPLC 一步就可对 21 肽进行分离纯化 ,其纯度达到 98. 6 % 。而32 肽由于样品组分更加复 杂 ,RPLC 一步纯化后其纯度仅有 80 % 。通过对色谱分离条件的再次优化 ,对 32 肽进行二次分离纯化 ,纯度达 到 96. 4 % 。在其最优化条件下 ,通过多次样品收集和冷冻干燥 ,分别制备了高纯度的 21 肽和 32 肽各 100 mg 。 关键词 　反相高效液相色谱 ,多肽 ,纯化 ,制备 1 　引　　言 随着现代生物技术的发展 ,出现了各种多肽类药物 ,多肽在临床医学中有巨大的应用价值。自从发 明固相法化学合成多肽以来 ,有关各种活性多肽的化学合成有了很大发展[1 ] ,但产物成分比较复杂 ,一 般是以目标多肽为主的几种结构相似的多肽混合物 ,因此 ,对这一混合物的分离纯化一直是一个重要的 研究课题 ,对其分离纯化的最优化研究就显得格外重要。此外 ,提供高纯度的多肽样品 ,对于其物化性 质、生物活性及其医药功能的研究具有重要的作用。从现代分离科学理论得出 ,色谱和电泳是目前所知 的分离效果最佳的两种方法。电泳仅能用于分离而不能用于多肽的制备[2～4 ] 。反相高效液相色谱 ( ) RPLC 具有分离效果好、分辨率高、回收率高的特点 ,在多肽的分离纯化和制备中备受青睐 , 因此 ,RPLC 是目前分离纯化和制备多肽的主要手段[4～9 ] 。本文拟用RPLC 对化学合成的 32 肽和 21 肽进行分离、纯 化和制备。 2 　实验部分 2. 1 　仪器 ( ) SCL10AVP 液相色谱仪 日本岛津公司 , 包括系统控制器、LC10ATVP 色谱泵、进样阀、SPD M10AVP 二极管阵列检测器 ,CLASSVP5. 33 色谱工作站。色谱柱为 200 ×4 mm I. D. 的不锈钢管 ,用匀浆 ( 法装填德国进口Nucleosil 40007 C18 反相色谱填料。KQ250 型超声波清洗器 昆山市淀山湖检测仪器 ) ( ) ( 厂 ,TLLC 台式冷冻离心机 军事医学科学院实验仪器厂 ,Barnstead EPure 纯水器 美国 Barnstead 公 ) 司 。 2. 2 　试剂 色谱纯乙腈( ) ( ) ( ) 天津科密欧科技有限公司 ;三氟乙酸 TFA