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实验5重组DNA转化
* 实验五 大肠杆菌感受态细胞的制备 及重组子的转化 一、目的要求 1.学习CaCl2法大肠杆菌感受态细胞制备的原理 和方法。 2.学习重组DNA转化的常用方法及影响因素。 二、原理 转化（transformation)： 异源DNA分子导入受体细胞的过程。 受体细菌 50-100mmol/L CaCl2 感受态细菌 重组体转入细菌 细胞膜 特性改变 转化方法 — CaCl2处理 外 源 DNA 导 入 受体 细 胞： ◆ CaCl2处理后的细菌转化或转染 ◆ 高压电穿孔 ◆ 聚乙二醇介导的原生质体转化 ◆ 原生质体融合 ◆ 细胞核的显微注射 ◆ 颗粒轰击技术 1970年Mandel和Higa发现用CaCl2处理过的大肠杆菌能够吸收l噬菌体DNA； 此后，Cohen等人用此法实现了质粒DNA转化大肠杆菌的感受态细胞。 感受态（Competence)： 细菌处于容易吸收外源DNA的状态。 致敏过程： ◆ 细菌在0℃，CaCl2低渗溶液中，细胞膨胀成球形； ◆ Ca2+使细胞膜磷脂层形成液晶结构，使位于外膜与 内膜间隙中的部分核酸酶离开所在区域，构成大 肠杆菌人工诱导的感受态； ◆ 加入DNA，Ca2+与DNA结合形成抗脱氧核糖核酸 酶的羟基-磷酸钙复合物，粘附在细胞外表面； ◆ 经短暂42℃热脉冲处理后，细胞膜的液晶结构发生 剧烈扰动，出现许多间隙，通透性增加，促进 DNA分子进入细胞内。 *
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