真空液相色谱法.pdfVIP

实验与技术 真 空 液 相 色 谱 法 黎 永 献 西（南农业大学，重庆，630716） 真空液相色谱法 V（acuumLiquidChroma- 加压洗脱，而VLC则靠柱后抽吸控制洗脱速度。 tographyVLC）是一种简易、高效、快速和便宜的 本法不仅分离天然产物是一种好方法，也可安排为 色谱分离技术。早在1969年澳大利亚JC.Coll等人 大学色谱教学实验。本文仅就实验技术作一些介 就用过。但迟至1977年始见报道[1.2]，1979年由 绍。 Targett教授起名真空液相色谱法[3]。目前已或功 仪器装置? Coll等人[10]提出的两种装置是简 地用于复杂天然产物：萜类、类脂[1,4-6]、双稠 易可行的。图la适于样品量 lg的分离，玻璃砂漏 吡咯啶生物碱[7]和二萜评类生物碱或其反应混合 斗用10-30ml，每个流分10-20ml，可在0.5M2的 物[8等的分离上。真空液相色谱法的实质是柱色 学生实验台上操作。图1b为较大量的分离装置，设 谱。制备薄层色谱 (PTLC)和真空抽滤技术的综 备是切割去底的500ml吸滤瓶，切边应磨平磨光， 合。它不同于快速液相色谱 (FLC)[9]，后者系单 然后密封在玻璃板上。漏斗可用100,150或250ml 一洗脱剂的连续操作，而VLC用间歇梯度洗脱， 的，每个流分为25，50或100ml。图1c特制装置[8] 每收集一个流分抽干洗脱剂，此点与PTLC很相似， 可用在样品多、条件较好的实验室。另外读者还可自 即薄层展开干后可重复展开；在FLC中采用柱前 行设计。如1d由玻管拉制而成。 色谱柱制备 色谱柱吸附剂系采用色谱用硅胶 萃取溶剂或低极性溶剂中的待分离样品，小心注入 或氧化铝 （60-200目或其他规格），漏斗烧结玻 色谱柱上面，再开动水泵使样品溶液吸入色谱柱 璃砂片孔径10-20。吸附剂在重力作用下轻轻地 中。样品层应是薄而均匀地在柱顶部。若样品不溶 敲打使其逐渐填入漏斗中 柱（高 5cm）。然后接 或（悬浮）于低极性溶液 如（石油醚）时，可将其 上水泵抽吸同时用玻塞挤压敲打，使其填装密实均 溶于易挥发的极性较大溶剂 如（CH2l2，CH3OH 匀。关闭水泵，迅速注入低极性溶剂于色谱柱表 等）中，并与等量吸附剂混合，小心温热搅拌在通 面。再打开水泵至溶剂抽干，关闭水泵 溶（剂须均 风橱中除去溶剂。将所得干燥混有样品的吸附剂均 匀通过色谱柱，如不均匀应重装）。将溶解于适量 匀填装在色谱柱顶上 避（免冲乱吸附剂床层，可 置圆形滤纸于柱顶部），然后进行洗脱。这两种装 以确定那些流分为纯物或混合物。以供核磁共振仪 样方式效果一样。若样品＜100mg时，色谱柱采用 或其他仪器测定或进一步分离。 05-1.04cm；若样品0.5-1.0g时，柱 2.54cm 实例 350mg加州假鹤虱(HackeliaCalifor- 合适；若样品1-10g时，柱55cm。样品更多时 nica)粗生物碱用VLC进行分离，漏斗30ml(3 最好用250ml玻璃砂漏斗，柱高5cm。当色谱柱液 5cm)，色谱硅胶 6（0-200目），柱3 3.5cm，梯度 流停止流动时，可能是由于顶部结晶或高聚物阻塞 洗脱剂组成从100%CHCl；到其中含2、5、8、10、10、 之故。这时用刮匙在柱上部0.5cm处搅动，流体即 15,20,23,25,28,30,50,100,100,100%CH3OH共 重新流动。 16 20ml流分，并用 TLC检查 （硅胶薄层板； 洗脱操作 洗脱采用水泵 真（空度20-70 CHCl3:CH3H=3:1,V/V；显色剂：氯铂氢酸碘 mmHg柱）抽吸，注意防止溶剂沸腾冲出。梯度