食品毒理学_04食品毒理学实训讲课.ppt

第四章 食品毒理学实训 实训一 实验动物的饲养管理 实训二 实验动物分组、标记和染毒技术 实训三 实验动物解剖和生物样本采集、制 备技术 实训四 小鼠急性毒性试验 实训五 小鼠骨髓细胞微核试验 实训六 小鼠精子畸变试验 实训一 实验动物的饲养管理 一、实训目的 实验动物的饲养管理是保障食品毒理学动物实验的基础技术，通过本次实训了解实验动物房的环境要求及管理要点，掌握实验动物饲养管理的操作方法和程序，掌握实验动物健康的观察和评价方法。 二、仪器和材料 小鼠、大鼠、兔、饲养盒、垫料、水瓶及辅助器材、开口器、体温表等 三、操作方法 1.大、小鼠的日常饲养管理 (1) 进入屏障动物房的准备 (2) 进入动物房后的观察 (3) 大、小鼠的喂料 (4) 大、小鼠的喂水 (5) 大、小鼠换饲养盒 (6) 清洁卫生和消毒 (7) 记录 2.兔的日常饲养管理 (1) 工作人员进入兔室前须着工作服，穿胶鞋，戴口罩，戴手套、帽子。 (2) 进入兔室后先观察兔只健康状况，记录异常兔只并交由兽医师处置。 (3) 饮水 (4) 饲料 (5) 卫生消毒 (6)记录 3.实验动物健康的观察和评价 （1）动物的外表与行为观察 （2）个体检查 （3）采食和饮水观察 四、实训结果 1.计算动物一昼夜之内的摄食量和饮水量。 2.对动物进行观察检查后，认真填写以下记录表，作出相应评价。 实训二 实验动物的分组、 标记和染毒技术 一、实训目的 实验动物科学的分组、标记和合理的染毒是取得良好试验结果和结论的前提，也是每一项毒理学试验首先要做的工作。通过本次试验掌握实验动物雌雄鉴别方法、科学分组、标记和常用基本染毒技术。 二、仪器和材料 1．实验动物：成年健康小鼠、大鼠、豚鼠、家兔若干只。 2．染料：结晶紫、苦味酸、品红。 3．毛笔或棉签。 4．动物称或天平 5．灌胃针 三、操作方法和步骤 (一)健康动物的选择和性别鉴定 1.健康动物选择： 2.性别鉴定： ①大、小鼠；②豚鼠；③家兔。 （二)称重、分组与标记 1．称重：根据不同试验要求，选择不同体重的动物。在同一组内，同性别动物体重差异应小于平均体重的10％，组间同性别动物体重均值应小于5％。称量大、小鼠体重时天平的感量要求在0.1 g以下。 随机分组表 3.编号及标记 （1）染色法。染料有苦味酸酒精饱和液(黄色)、甲基紫酒精饱和液(紫色)或美蓝溶液(蓝色)、0.5％中性红或品红溶液(红色)等。具体方法：a.按右上肩、右肋、右后肢、颈部、背中、尾根、左前肢、左肋、左后肢顺序分别为1-9号，不染色为10号［图4-1(a)］；b.以头部为1号，按顺时针方向依次在右耳、右前肢、右后肢、颈部、背中、尾根、左耳、左前肢、左后肢染色，分别为2-10号［图4-1(b)］ 。 （2）耳缘孔口法。大、小鼠常用此法。在耳缘不同部位（图4-2)用针穿孔和剪刀剪口，穿孔和剪口后，用墨黑酒精液涂抹，使其着色，不易脱失。常以右耳代表个位，左耳代表十位。孔表示1号、2号、3号和10号、20号、30号，一道口为4号、5号、6号和40号、50号、60号，二道口为7号、8号、9号和70号、80号、90号。穿孔和剪口配合，也可编1-99号，不穿不剪为100号。 （3）烙印法。适用于兔以上的动物。耳部消毒后，用刺数钳在动物耳上刺号，再以墨黑酒精液着色。也可用铸铁号码烧红后烙在动物体表部位，留下标记。这种方法可较长时间保留记号，适用于大动物标记。 （4）号牌法。适用于大动物。将金属或塑料牌号固定在该动物的耳上或颈下，也可挂在饲养动物的笼上。 （三)抓取和固定方法 1.小鼠 捉拿方法有二种：一种办法是用右手提起尾部，放在鼠笼盖或其它粗糙面上，向后上方轻拉，此时小鼠前肢紧紧抓着粗糙表面，轻轻抚摸，使安静，然后迅速用左手拇指和食指捏住小鼠双耳和颈背部皮肤，并以小指和手掌尺侧夹持其尾部固定于手中(如图4-3)；另一种抓法只用左手，先用食指和拇指抓住尾都，再用手掌尺侧及小指夹住尾根，然后用拇指及食指捏住其颈部皮肤。后者适于快速捉拿给药。 2．大鼠 基本同小鼠，但大鼠牙齿很尖利，不要突然袭击式去抓。捉拿时右手慢慢伸向抓鼠尾，尽可能向尾根部靠近，将大鼠放在粗糙面上；左手戴防护手套，抓起其颈背部尽可能多的皮肤并固定其头部以防咬伤(如图4-4)。也可将大鼠固定在固定器。注意捉拿时勿用剧烈动作激怒之。 3．豚鼠 以拇指和中指从豚鼠背部绕到腹下，另一只平托其臀部(如图4-5)。体重小时可用一只手捉拿，体重大时宜用