第二章微生物的纯培养和显微技术.ppt.ppt

第 二 章 微生物的纯培养和显微技术 主讲人：刘石泉 主要内容： 2.1 微生物的分离和纯培养 2.1.1 无菌技术 2.1.2. 用固体培养基分离纯培养 2.1.3. 用液体培养基分离纯培养 2.1.4. 单细胞（孢子）分离 2.1.5. 选择培养分离 2.1.6. 二元培养物 2.1.1 无菌技术 无菌技术：在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其它微生物污染的技术。 它是保证微生物学研究正常进行的关键 A 微生物培养的常用器具 常用器具：试管、玻璃烧瓶、平皿等器皿都要灭菌 培养基：培养微生物营养物质。 压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广 电热干燥箱：干热消毒（160 ℃ ，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒 滤器：过滤除菌，大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌 超净工作台：为操作提供无菌环境 紫外灯 ：紫外线消毒。 主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒 B 最常用的灭菌方法 1. 干热灭菌：一般玻璃用具，如培养皿、吸管等用报纸包好后，放烘箱中，使温度逐渐升至150～160℃，保持2小时后，关闭电源，使缓慢冷却（降温太快时玻璃易碎），即灭菌完毕。 ①常压法（间歇灭菌法）：是用蒸汽锅（或普通锅）蒸，温度不超过100℃。每次一小时，共三次，每次间隔24小时（杀死孢子）。 3. 过滤除菌法 本法系用滤过方法除去活的或死的微生物的方法，是一种机械除菌的方法。本法主要用于对热极不稳定的药物小针剂或冻干粉针制剂的除菌。 除菌过滤器采用孔径分布均匀的微孔滤膜作过滤材料，为保证阻止细菌和细菌孢子通过滤器，滤膜的孔径一般不超过0.22μm。 对于接种针或其它金属用具灭菌，可直接在酒精灯火焰上烧至红热。此外在接种过程中，试管或三角瓶口，也采取通过火焰达到灭菌的目的。 ① 70％的酒精：操作前手或器皿的表面杀菌，载玻片，盖玻片的浸泡等。 ② 1:1000 新洁尔灭溶液，浸泡时间为30分钟，常用于表面的消毒。 ③ 福尔马林（40％甲醛液）：用于空间熏蒸灭菌，加热或加高锰酸钾使其放出甲醛气体。注意将空间密闭并维持24小时。 6. 紫外线灭菌 用于接种室等空气灭菌。 压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广 电热干燥箱：干热消毒（160 ℃ ，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒 滤器：过滤除菌，大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌 超净工作台：为操作提供无菌环境 紫外灯 ：紫外线消毒。 主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒 C 接种操作—最基本技术 超净台 2.1.2 用固体培养基分离纯培养 菌落（colony） ：由单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度后，形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。 菌苔(lawn)：固体培养基表面众多菌落连成一片，呈片状，这就是菌苔。 A 相关概念2——纯种微生物的分离 在自然界中，各种各样的微生物总是混杂在一起的，要研究和利用某一微生物，就必须把它同其他微生物分开，才能得到只含有同一种微生物的纯种微生物。这种方法叫纯种微生物的分离 大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。 B 纯种微生物的分离方法 稀释倒平板法 涂布平板法 平板划线分离法 稀释摇管法 1 稀释倒平板法 稀释：先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......）； 倒平板：然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板； 培养：保温培养一定时间即可出现菌落。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。　 2. 涂布平板法 先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板； 将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面； 经培养后挑取单个菌落； 3. 平板划线法 4. 稀释摇管法(dilution shake culture method） 2.1.3 用液体培养基分离纯培养 一些细胞大的细菌、许多原生动物和藻类等，需要用液体培养基分离来获得纯培养。 2.1.4 单细胞分离 2.1.5 选择培养分离 2 富集培养 土悬液—培养基+硫磺—分离出硫杆菌 土悬液—以羟基苯甲酸为唯一碳源的培养基——分离出能降解羟基苯甲酸的微生物。 2.1.6 二元培养物 纯培养物：只含有一种微生物的培养物叫做纯培养物。