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ELISA实验标本的采集、处理和保存 发布时间:2009-10-19 ELISA实验标本的采集、处理和保存 ? 能够应用ELISA 实验的样本种类很多，有血清，血浆，细胞上清，细胞裂解液，尿液，关节滑液，脑脊液，肺泡灌洗液，各种组织的组织匀浆；采集和处理的方式都不相同。下面就列出了biotnt 收集的给类样本的采集、处理和保存方式。方法大多出自文献和试剂盒说明书，部分方法经Biotnt 验证过，但有的方法并没有实际操作过，所以，以下方法仅供参考。 ? ? 一、ELISA实验中血清的采集、处理和保存； 1、 真空采血针采集2ml新鲜血液，加入无菌试管中； 2、 采血后室温静置1小时； 3、 将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。 4、 取上清。 分装冻存备用， 2-8℃下，可放置保存24-48小时； -20℃下，可放置保存1个月； -70℃下，可放置保存6个月； 5、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。? 大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的 ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染，因为菌体中可能含有含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜 时检测。如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。 ? 二、ELISA实验中血浆的采集、处理和保存； 1、 真空采血针采集2ml新鲜血液，加入无菌试管中； 2、 按1:9加入抗凝剂（EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠），30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染；（也可以直接用抗凝管采集）； 3、 将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心5min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。 4、 取上清。 分装冻存备用， 2-8℃下，可放置保存24-48小时； -20℃下，可放置保存1个月； -70℃下，可放置保存6个月； 5、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。?请注意指标说明书上对于抗凝血剂是否有特殊要求，建议使用EDTA。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外，其他成份均同等于血清。 注意事项：制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA,抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。 ? 三、ELISA 实验中尿液的采集、处理和保存； 1、 采集尿液样本500ul，加入无菌试管中； 2、 将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的样本留上清，弃下面沉淀。 3、 取上清。 分装冻存备用， 2-8℃下，可放置保存24-48小时； -20℃下，可放置保存1个月； -70℃下，可放置保存6个月； 4、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。 ? 四、ELISA 实验中脑脊液的采集、处理和保存； 1、采集脑脊液样本，加入无菌试管中； 2、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的样本留上清，弃下面沉淀。 3、取上清。 分装冻存备用， 2-8℃下，可放置保存24-48小时； -20℃下，可放置保存1个月； -70℃下，可放置保存6个月； 4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。 ? 五、ELISA 实验中细胞上清液的采集、处理和保存； 1、采集细胞培养上清液500ul，加入无菌试管中； 2、将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心10min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。 3、取上清。 分装冻存备用， 2-8℃下，可放置保存24-48小时； -20℃下，可放置保存1个月； -70℃下，可放置保存6个月； 4、根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。 ? 六、ELISA 实验中细胞裂解液的采集、处理和保存；（需要测蛋白浓度） 1、 取细胞培养板或细胞悬液，用PBS（PH7.2-7.4）洗涤细胞培养板1-2次。 2、 通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂（裂解液），使细胞破坏并放出细胞内成份。 3、 将采集血液用离心机4℃，2500rpm离心20min，，将离心好的匀浆留上清，弃下面沉淀。 4、 取上清。 分装冻存备用， 2-8℃下，可放置保存24-48小时； -20℃下，可放置保存1个月； -70℃下，可放置保存6个月； 5、 根据你的实验需要，取适量上清夜进行各种ELISA测定。 ? 七、ELISA 实验中肺泡灌洗液的采集、处理和保存； 1、 10%水合氯醛溶液，腹腔麻醉。 2、 打开腹腔，另取10ml注射器行下腔静脉采血，尽可能将血放尽。 3、 在冰面上对左肺进行肺灌洗。取37℃生理盐水5ml，分三次灌洗：2ml、1.5ml、1.