第十章基因工程生化产品制备原理及方法案例.ppt

生化工艺学课件第十章 基因工程生化产品制备原理及方法;第十章 基因工程生化产品制备原理及方法;§10.1 概述;生物技术医药产业;蛋白质药物的应用限制;;基因工程药物的研究进展;基因工程药物的研究进展;;1、转基因植物基因工程疫苗;2、转基因动物乳腺生物反应器生产基因工程药物;2、转基因动物乳腺生物反应器;§10.2 基因工程生化产品的制备程序;一、基因工程研发的程序;二、基因工程的基本过程;基因工程生化药物的生产;三、获得目的基因;来源于真核细胞的产生基因工程生化产品的目的基因，不能直接分离、克隆，Why？;2、从DNA文库筛选基因;b.cDNA文库：只含有在一定生物或一定细胞和组织中表达的基因 表达目的基因的细胞中提取总RNA，寡聚脱氧胸苷（dT）纤维素柱从总RNA中提取mRNA，以mRNA为模板，利用逆转录酶合成互补DNA，再用DNA聚合酶合成cDNA的双链，将产生的双链cDNA片段插入到适当的载体中克隆 RNA转录加工过程中，内含子序列已被剪切掉，cDNA文库适于在原核中表达，但cDNA只包含蛋白质的结构基因部分，缺少有关的调控序列（需根据表达载体的结构配以相应的调控序列）;2）DNA文库中筛选目的基因;利用标记DNA探针从DNA文库中筛选目的基因的方法：;3、人工合成基因;4、载体的制备与连接;（共有24种核酸内切限制酶对pBR322 DNA分子只具有单一识别位点。其中有9种限制酶其识别位点位于四环素抗性基因区，还有3种限制酶在氨苄青霉素抗性基因（ampr）内具有单一的识别位点，在这些位点插入外源DNA则会导致ampr基因的失活→因DNA插入而导致基因失活的现象称为插入失活效应。）;5、目的基因与载体连接;;7、转化子的筛选和鉴定;;§10.3 大肠杆菌表达系统的优化;大肠杆菌表达系统;§10.3.1 选择和构建强的启动子;E.coli常用强启动子;§10.3.2 优化翻译起始区;§10.3.4 使用宿主偏爱的密码子;§10.3.5 提高质粒拷贝数;§10.3.6 利用强转录终止子;§10.3.7 增强质粒稳定性;§10.3.8 宿主细胞生理学;§10.4 非大肠杆菌表达系统;枯草芽孢杆菌系统特点;枯草芽孢杆菌系统特点;§10.4.2 酵母表达系统;§10.4.3 昆虫细胞及幼体表达系统;§10.4.4 哺乳动物细胞系统;哺乳动物细胞系统操作方法;§10.5 工??菌的发酵;基因工程菌的培养设备;§10.6 基因工程生化产品的分离纯化;分离纯化方法的选择;§10.7 基因工程生化产品的质量控制;§10.7.3 纯化工艺过程的质量控制;§10.7.4 目标产物的质量控制