掌握鱼类血红蛋白测定的原理和方法。.ppt

实验四 鱼类血红蛋白含量测定;【动物与器材】 鱼，血红蛋白计（Shali氏）1套，0.1mol／L盐酸（或1％盐酸）、蒸馏水、95％酒精，乙醚、滴管、小玻棒、棉球。;沙利氏血红蛋白计;图1 沙利氏血红蛋白计 ;【方法与步骤】 1．准备盐酸：用滴管吸取0.1mol/L盐酸，滴5～6滴入刻度比色管内（约加到管下端刻度2处）。 2．采血。鱼类采血方法多种，可采用尾静脉采血法。必要时可从心脏直接采血，但这种方法会使心脏受到损伤而不适宜继续的和多次取血样。 将抽出的血液放入经抗凝剂处理的凹玻片内，用吸血管吸取鱼血至20mm3（即20μl）刻度处（要准确）。将管尖端外面的血液拭去。 3．反应。将吸血管迅速插入刻度比色管底的盐酸中，徐徐滴血于液体底层，并利用上层的盐酸将吸血管洗涤多次（避免起泡），使管内壁血液全部进入溶液中。取出吸血管后，轻轻摇动比色管，使血液与盐酸充分混合，静置10分钟，使管内盐酸和血红蛋白作用完全，形成棕色的高铁血红蛋白。 ;4．比色。用滴管将蒸馏水逐滴加入比色管中，每加一滴后应摇匀或用小玻棒搅匀，常观察比色管内颜色，直到色度与标准玻璃的色度相同位置（应在自然光下比色）。 5．记录。取出刻度比色管，观察并记录下管内溶液凹面最低处的刻度数字，即为每100ml血液中血红蛋白的克数。 ;【注意事项】 1 ．采血操作要迅速、准确，不能凝血（必要时可用1%肝素钠或其他抗凝剂处理注射器），也不能有气泡，否则须弃去重采。 2．吸管使用后，必须立即洗涤，并晾干； 3．血红蛋白计的吸血管很容易损坏，应妥加爱护。管内有凝血时不可用金属丝疏通，可浸入1%氨水或45%尿素溶液中（本实验采用的是氨水）； 4．血液与盐酸作用的时间不可过短，必须在10分钟后方可稀释比色，否则血红蛋白不能充分转变成为高铁血红蛋白。 ;说明： 1 ．血红蛋白含量测定实验用的旧吸血管刻度为20CMM，其含义为20MM3（20CMM，20 cubic mm）吸血时吸至此刻度； 2 ．采血时从鱼的尾部体侧稍微偏向腹侧进针，方向指向脉脊，并刺入脉棘下静脉中； 3 ．沙利氏血色素计的原理：在与标准色相同的情况下，溶液的总体积与血红蛋白的含量成正比。;血细胞记数 稀释200倍 1mm3红血球数=N*10000 （N：5个中方格中红血球总数） 1mm3白血球数=M*500 （M：4个大方格中红血球总数）