实验四 超数排卵.ppt

实验四 小鼠的超数排卵及胚胎收集 ;一、实验目的：利用外源生殖激素进行超数排卵处理，收集胚胎及胚胎形态学的观察。掌握超数排卵的各个技术环节，了解胚胎的发育及质量评估。 ;二、实验材料 1．动物 4-6周龄供体昆白系雌性小鼠，成年雄  性小鼠与之1:1—1:3配比（亦可利用  其它实验动物） 2．药品 PMSG、hCG、FSH、LH；生理盐水、 75%酒精。 3．器械 一次性注射器（10 ml、5ml、1 ml）、  手术刀、剪刀、镊子、表面皿、培养 皿、显微镜。 ;三、鼠的超数排卵和胚胎收集?;四、实验步骤 1、超数排卵 取4-6周龄性成熟雌性小鼠，第1天注射 30 IU PMSG, 第3天注射30 IU hCG，注射后与性成熟的公鼠同笼，次日早晨检查阴道栓（第4天），有栓的小鼠分开饲养。;2、胚胎的收集 注射hCG后72-84 h（第6天）处??小鼠（颈椎脱臼法），将处死并固定好的小鼠，沿腹中线剪开腹腔，向前方揭去肠胃内脏，即可在肾脏后方看到两侧呈的卵巢、输卵管和子宫，找到输卵管壶腹部，剪下，置于表面皿或培养皿中，用细针将其划破，能看见一团物质流出，此就是受精的胚胎。;1;;3 胚胎鉴定 将培养皿置于解剖显微镜下，先用10X的镜头寻找胚胎，然后放大至40X上鉴定。 1）未受精卵 呈圆球形，外周有一圈折性强且发亮的透明带，中央为质地均匀色暗的细胞质，透明带和卵黄膜之间的空隙很小甚至看不到 2）早期胚胎 卵子受精后，经过卵裂过程，当处于桑椹胚或早期囊胚期的胚胎，卵裂细胞排列紧密，形态呈圆球形，其显著特征是透明带平坦而均匀，边缘整齐，形态清晰，卵裂球大小相等，颜色一致。 ;*;;*;*;;具体时间安排 周四（11.7）：注射PMSG 周五（11.8）：注射HCG及合笼 周六（11.9）：检栓及分笼（上午） 周二（11.12）：收集胚胎;;四、记录内容