检定菌验收、制备、储管、使用、销毁管理规程.doc

第  PAGE 7 页 共  NUMPAGES 7 页 第  PAGE 1 页 共 7 页 ****制药有限责任公司GMP文件 文件编码： ·066-C 原编号： ·066-B文件名称：检定菌验收、制备、保藏、 传代、使用、销毁管理规程文件类型：SMP编制人：编制日期： 年 月 日审核人：审核日期： 年 月 日批准人：批准日期： 年 月 日生效日期： 年 月 日发文： 质量部编制单位：质量部分发： 质量部、化验中心规程依据: 中国药典2010年版二部及菌种使用说明书检定菌验收、制备、保藏、 传代、使用、销毁管理规程 1. 目的： 本规程规定了质量管理部门实验用菌种的验收、制备、储管、使用、以及销毁等的相关规定。适用于微生物限度检查、无菌检查、抗生素微生物（效价）测定、评价防腐剂和抗菌剂的抑菌效果和确认灭菌效果、检验方法的验证、培养基的适用性检查，样品检验时的阳性对照等。 2. 适用范围： 适用于检验用菌种。 3. 责任者： 化验中心检定菌保管员及微生物检测、无菌实验人员。 4. 内容： 4.l 检定菌保管员，必须熟悉检定菌的特性、贮存条件，有足够的菌种保存经验。 4.2 检定菌的来源 标准菌株由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心（China Medical culture collection ,CMCC）提供的冷冻干燥菌种（0代）或由上级药检部门已接种好的菌种斜面（3代）。黑曲霉的0代菌种为保存于含15%甘油的0.9%无菌氯化钠溶液中的孢子悬液冷存管。中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌种的标签CMCC（B）代表细菌（bacteria）,CMCC(F)代表真菌（fungi）每种菌具有固定的代号。 4.3 检定菌的验收 从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。接收菌种时应检查安瓿的数量和名称，和每一支安瓿的完整性。在相应的菌种接收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，内容包括：菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期???。新购入的0代原始菌种储存于－20℃，有效期为三年。从上级药检部门购买的已接种好的菌种斜面（3代）应检查菌种管是否完好。储存于2～ 8 ℃，有效期为3个月。 4.4 检定菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备 4.4.1准备物品及试剂：接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球 4.4.2准备培养基： 改良马丁琼脂培养基（用于黑曲霉复苏、复壮） 根据《培养基配制管理规程》（LM/10·T·067）配制，然后分装10ml每管，121℃蒸汽灭菌30分钟，然后放置冷却成斜面。 液体硫乙醇酸盐培养基（用于生孢梭菌复苏、复壮）或营养肉汤培养基（用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮）。 改良马丁培养基（用于白色念珠菌复苏、复壮） 以上培养基根据《培养基配制管理规程》（LM/10·T·067）配制100ml至锥形瓶中，121℃蒸汽灭菌30分钟，室温冷却。 4.4.3设备：洁净工作台 4.4.4操作步骤： a.打开洁净工作台。 b.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并让其自然风干。 c.用一小砂轮在安瓿的上部划一条线，用手轻轻将安瓿掰开（开启安瓿时必须小心，因为安瓿遇热时可能会破裂）。 d.以无菌方法用一无菌吸管从已准备好的上述液体培养基中移取0.5～0.8 ml到安瓿中。 e.轻轻地旋转安瓿以使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解。 f.用无菌吸管将安瓿内菌液全部转接到相应的液体培养基。 g.根据安瓿上所标明的不同菌种类型而将其培养于相应的温度（细菌培养温度30～35℃，培养18～24小时；真菌培养温度23～28℃，培养3～5天。观察是否浑浊，浑浊说明菌种复苏生长；若不浑浊，细菌应延长培养时间至7天，真菌应延长培养时间至14天，若仍未浑浊，按本规程第4.6.3项下灭菌处理。 h.黑曲霉的菌悬液先室温待菌悬液融化后用无菌吸管吸取管内液体1～2滴滴在改良马丁琼脂斜面上，用吸管涂布均匀，置23～28℃培养5～7天，斜面正面为黑褐色厚绒状，色泽均一，不应有杂色，斜面侧面无色，接近菌层培养基略带黄色。确认后用含有0.05%（ml/ml）的吐温-80的0.9%无菌氯化钠溶液洗脱到无菌试管中。 i.取经复苏后的上述细菌菌液8-10ml至100ml4.4.2项下液体培养基中按g项操作对菌种进行复壮。以无菌技术向复壮后的菌种中加入100ml20%的无菌甘油混匀，1-2ml/管分装于冻存管。每个菌种制备10支，按顺序进行编号，最后一