自阻装抗HBs膜免疫复合电极的制作.doc

PAGE  PAGE 5 自组装抗-HBs膜免疫复合电极的制作 王芸芸 吴同飞 （中山大学化学与化学工程学院2000级，广州510275） 指导老师：蔡沛祥 教授 摘 要：用硫脲在金电极表面自组装单分子层。然后通过戊二醛耦联乙肝表面抗体(抗-HBs)，得到电位型的乙型肝炎抗体膜免疫电极，用于检测乙型肝炎表面的抗原(HBsAg)。叙述了单个免疫电极的制备方法及复合电极的制备方法。 关键词：乙型肝炎表面抗原，免疫电极，自组装，复合电极。 乙型肝炎是一种常见多发病，呈世界范围内流行。根据抽样检查估计，全世界约有两亿人感染了乙型肝炎病毒。 现行检测乙型肝炎表面抗原(HbsAg)的酶联免疫吸附测定法(ELISA)，放射免疫法(RIA)与免疫电镜法(IEM)等，虽然灵敏可靠，但需要专门的设备，且检测周期较长。本文采用自组装技术，依次在金电极表面形成单分子层硫脲、戊二醛、抗-HBs，??为检测HbsAg的电位型免疫电极。用硫脲进行自组装是利用其有两个-NH2基团，其单分子层上的氨基密度高，则将被耦联的抗-HBs密度也高，从而有利于对相应抗原的响应。而复合的自组装抗-HBs膜免疫电极又因其能将工作电极和参比电极复合在一起，表现出其独特的方便性，并且本复合电极可方便地更换其中的工作电极，有利于提高工作效率。 一、实验部分 1.1 仪器、试剂和材料 pH-mV计(广州登峰分析仪器厂)，抗-HBs(阳性)对照血清，HBsAg(阳性，阴性)对照血清， 戊二醛 甘氨酸(上海化学试剂公司) ，0.1mol/L磷酸氢二钠-0.1mol:/L磷酸二氢钾缓冲溶液(PBS，pH为7.4)，0.2M甘氨酸-盐酸（pH=2.8）洗脱液，其余试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。 金电极(0.5mm)；塑料管粗细两种；银丝；导线。 1.2 抗-HBs膜免疫电极的制备 Au电极(0。5mm)经金相砂纸抛光后，浸入V(H2O)∶V(HNO3)=1∶1溶液中10min，取出冲洗，用超声波在丙酮中处理10min，取出冲洗。将金电极放入硫脲饱和溶液中浸泡8h，用蒸馏水反复冲洗电极表面以除去非化学吸附物，再将此电极浸入5%戊二醛溶液中4h，取出冲洗，然后在抗-HBs阳性对照血清中于4℃下浸泡24h后取出，清洗电极表面，放入0.1mol/L甘氨酸-0.02mol/L磷酸盐溶液中1h以屏蔽未反应的醛基。最后分别用HCl-NaCl(pH=3.0)溶液和PBS对电极进行清洗，即得以金电极为基体的抗-HBs膜免疫电极。 1.3 实验方法 免疫电极对HBsAg电位响应的测试方法:以抗-HBs膜免疫电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，将两电极插入10mLPBS溶液中，启动搅拌器，用pH-mV计测量电位。当电位稳定后(E1)，用微量进样器吸取100μLHBsAg对照血清(阳性或阴性)，记录电位(E2)随时间的变化，以ΔE=E2-E1表示免疫电极对HBsAg的电位响应值。检测过的电极用0。2M甘氨酸-盐酸（pH=2。8）洗脱液洗脱，重复用于测量HBsAg抗原。 1.4 复合电极的组装及其使用 以抗-HBs膜免疫电极为工作电极，Ag-AgCl电极为参比电极，以下图的形式组装起来。 使用时，可以将复合电极插入PBS溶液中，测其稳定电位后，再往PBS溶液中加入被测血清，再测定其稳定电位值，即可得电位响应值（），即可判断被测血清为阴性还是阳性。 也可以把复合电极的敏感膜朝上，向敏感膜上滴一滴PBS，测定其稳定电位后，再加一滴被测血清，测定其稳定电位值，即可得电位的响应值（），根据响应值可判断血清为阴性还是阳性。 二、结果讨论 2.1 免疫电极对HBsAg的电位响应 利用免疫电极分别测定阴性对照血清和阳性对照血清样液，结果表明：电极对阴性对照血清样液的电位响应ΔE值很小且随时间变化不大(小于5mV)，而对阳性血清ΔE变化较大。（见表1和图1） 　　　　　E/mV　　　　　|E2-E1|/mV　0s15s30s45s60s90s120s180s240s300s阳性对照血清725140332922161063699759463933262216121087684232272217127536547282116131085324542231815139742141阴性对照血清-211-212-213-213-214-215-215-215-216-2165-178-181-181-181-181-181-181-182-182-1824