利用酵母双杂交筛选豌豆叶绿体镁离子螯合酶D亚基相互作用蛋白_余静.pdf

DOI:10.13865/ki.cjbmb.2011.09.015 中国生物化学与分子生物学报 ? ISSN 1007-7626 http / / cjbmb． bjmu． edu． cn 2011 年 9 月 ? ? ? CN 11-3870 / Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 27 9 864 ～ 872 利用酵母双杂交筛选豌豆叶绿体镁离子 螯合酶 D 亚基相互作用蛋白 余 静， 罗 韬， 罗美中 * ? 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉 430070? 摘要 植物叶绿体镁离子螯合酶是四吡咯化合物生物合成途径中合成叶绿素分支? 镁分支? 的第 一个酶，它催化镁离子螯合到原卟啉 IX 中，形成镁原卟啉 IX． 镁离子螯合酶是 1 个由 3 个亚基 H、 D 和 I 组成的多亚基酶，3 个亚基均由细胞核编码，进入叶绿体发挥功能． 该酶不仅控制着叶绿素的 合成，其各个亚基还具有很多其它的功能? H 亚基既是 ABA 受体，又参与叶绿体到细胞核的反向信 号传导? D 亚基也与叶绿体到细胞核的反向信号传导有关． 本文利用酵母双杂交技术，将编码豌豆 镁离子螯合酶 D 亚基的 cDNA 片段构建到诱饵载体 pGBKT7 中，分别用共转化的方法筛选豌豆叶 片细胞核编码的均一化 cDNA 文库和用 Mating 的方法筛选豌豆叶片叶绿体编码的均一化 cDNA 文 库，共得到 121 个候选克隆，其中有 60 个克隆共编码 21 个叶绿体蛋白质，19 个来自于核基因编码， 2 个来自于叶绿体基因编码． 这些候选蛋白参与叶绿素合成、卡尔文循环、叶绿体蛋白质翻译和叶 绿体基因转录等多个代谢过程． 酵母点对点和 GST-pull down 对其中的 4 个蛋白做了进一步的验 证． 这些结果将为 D 亚基的功能研究提供进一步的线索． 关键词 镁离子螯合酶 D 亚基? 酵母双杂交系统? GST-pull down? 叶绿体 中图分类号 Q71 Screening for Proteins Interacting with Mg-chelatase D Subunit in