孕产妇及所生儿童艾滋病检测-章三英讲解.ppt

样本的采集和处理 1.对从其他实验室送的样品，注意检查并注明其送检单与标本记录的符号.样品管遗漏.破损情况。如有遗漏要把残留的样品移出，并对管壁和盛器消毒。要检查并记录样品的质量有无溶血，脂血，细菌感染等情况。 2.对实验室自己采集的标本，注意是血液先自然存放1-2小时候，再用3000rpm离心15分钟，吸出上清液备用，如要几天内检查可放入2-8℃冰箱，要储存则置于-20℃低冰箱内。 3.滤纸片的采集.用移液管从样品管中吸取100uL抗凝全血或血浆，对准滤纸片印圈中心处蒋样品滴在滤纸上，或者穿刺后自皮肤伤口流出的末梢血直接滴加在滤纸印圈的中心处。在室温下自然干燥至少4小时，不要加热或堆叠，自然干燥后放入密封袋中。 试剂盒包括 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 1.硝酸纤维膜（试剂膜条） 2.阴性对照 3.强阳性对照 4.弱阳性对照 5.浓缩样品稀释缓冲液(10×) 6.浓缩洗膜缓冲液( 20×) 7.酶结合物 8.底物液 9.封闭粉 10.孵育板， 11.使用手册 12.镊子 18或36条 1管 1管 1管 1瓶 1瓶 1管 1瓶 10袋 2或4块板 1本 1支 原理 加样 洗 加酶结合物 (Ab-HRP) 洗 加底物 ? HIV-1 病毒裂解蛋白 ? HIV-2 多肽条带 ? 内对照 ? 可选快速或过夜检测方法 ?其可检测标本中针对HIV不同抗原的抗体，故被用做 确认试剂。 ?不同的研究机构有不同的判定标准 gp140/gp105、gp36， 也可为gp125/gp80、gp36 p56、p26、p16 p68、p53、p34 gp160/gp120 gp41 p55、p24、p17 （或p18） p66（或p65）、p51、 p31 env gag pol HIV-2抗体特异带 HIV-1抗体特异带 WB结果判定标准 无条带或只有P17 无条带 2 ENV+GAG+POL 1 ENV + p24/p31 WHO FDA（USA） 阴 性 阳 性 组 织 我国的判断标准 ? HIV-1抗体阳性 同时符合以下2条标准可判为HIV-1抗体阳性：①至少有2条env带（gp41和gp160/gp120） 出现，或至少1条env带和p24带同时出现；②符合试剂盒提供的阳性判定标准 ? HIV抗体不确定 出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性 ? HIV抗体阴性 无HIV抗体特异带出现 《全国艾滋病检测技术规范（ 2009 版）》 HIV抗体确认实验结果 a 强阳性对照（HIV-1和HIV-2） b弱阳性对照（HIV-1） c阴性对照 d典型的HIV-2血清阳性反应 a b c d gp160 gp120 p66 p55 p51 gp41 p39 p31 P24 p17 血清对照 HIV-2特异带 试验中应注意的问题 ? 1.充分浸泡 ? 2.充分洗涤 ? 3.显色时间 ? 等等 HIV抗体确认实验流程图 结果汇报 ? 符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（＋）”； 符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性（＋）”， 并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。 ? 符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（－）”。如疑 似“窗口期”感染，建议进一步做HIV-1P24抗原检测和HIV核酸检 测，尽早明确诊断。 ? 符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”， 在备注中应注明“4周后复检”。 《全国艾滋病检测技术规范（ 2009 版）》 * 孕产妇及其所生儿童艾滋病检测 南充市顺庆区妇幼保健院 章三英 2015.11.25 全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2009年版） 检测依据 ： 2014年修订版还没正式推出 报告 “HIV抗 体 阳 性 ” 报告 “HIV抗 体 阴 性 ” 无反应 提供疑似阳性咨询 进一步做补充试验 不确定 无反应 两种均无反应 或 原有试剂双份进行复检 两种均有反应 或 一有反应一无反应 有反应 原 有 试 剂 +另 一 种 筛 查 试 剂 进 行 复 检 提供咨询 进行核酸检测等 其他补充试验 孕期艾滋病检测及服务流程 孕期初次接受产前保健的孕妇 主动提供有关的检测信息 采 集 血 样 本 ， 进 行 HIV抗 体 筛 查 试 验 检