(新编)课题2-土壤中尿素的细菌的分离与计数选编.ppt

巩固练习 1.使用选择培养基的目的是（ 　） A.培养细菌　　 B.培养真菌　　 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3　　 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素 C D 3.下列说法不正确的是（ 　） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶。 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值。 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。 4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（　　） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐 B C 之后讲课本P22的最上面内容 课题2 土壤分解尿素的细菌的分离与计数 课标领航 1．举例说明什么是选择培养基，并研究培养基对微生物的选择作用。 2．设置重复组和对照组，对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数。 【重点】　选择培养基的作用。 【难点】　菌落数目的统计。 课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 一、研究思路 (一)筛选菌种 1 实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 启示： DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 寻找目的菌种时要根据它对_______________，到相应的环境中去寻找。 生存环境的要求 耐高温的酶 耐高温生物体 耐高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 Taq细菌 筛选原因:因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多 数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 2 实验室中微生物的筛选原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 ②该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 思考： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 从功能上属于哪类培养基？ 固体培养基 选择培养基 ③此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 原则上能。培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 3 选择培养基： 在微生物学中，将允许______________________，同时_________________________生长的培养基。 特定种类的微生物生长 抑制或阻止其他种类微生物 4要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；配置合适的培养基 方法： ⑴抑制大多数微生物生长 ⑵造成有利于该菌生长的环境， 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。 （1）将土壤中的固氮菌分离出来 （2）将土壤中自养微生物分离出来 举一反三 （3）筛选出抗青霉素的微生物 （4）筛选出耐高浓度食盐的微生物 不加氮源的无氮培养基 不加含碳有机物的无碳培养基 加入青霉素的培养基 加入高浓度食盐的培养基 思考：④怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离 尿素 细菌 判断该 培养基 有无选 择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长尿素细菌 生长多种微生物 是 如何对细菌进行计数？ 1 显微镜直接计数： 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 缺点: 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察； 2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 (二)统计菌落数目 方法 运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。 原理