常规实验所用溶液配方大全汇编.doc

常规实验所用溶液配方大全 常规实验所用溶液配方大全 1.0.5mol/LEDTA 配制 组分浓度： 0.5mol/l EDTA， PH=8 配制量：500ml 配制方法(1)称取93.06克EDTA.Na2.2H2O，置于500 ml烧杯中 (2)加入约400ml dd H2O.用热磁力搅拌器充分搅拌 (3)用NaOH调节PH值到8，约用10克固体NaOH (4)在溶液冷却后，再用NaOH调节至PH=8 (5)加dd H2O将溶液定容到500 ml (6)高温高压灭菌后，室温保存 2.NaOH溶液的配制 组分浓度：5 mol/l NaOH 配制量：100 ml 配制方法(1)称取固体NaOH20克于容器中 (2)加入dd H2O定容到100 ml 3.100 mmol/l Tris-HCl的配制 组分浓度： mmol/l Tris-HCl， PH=6.4 配制量：250 ml 配制方法(1)称取3.025克Tris于250 ml烧杯中. (2)加入约200ml dd H2O充分搅拌溶解. (3)用浓盐酸调节PH值到6.4.所用浓盐酸约3 ml (4)将溶液定容至250ml (5)用棕色瓶分装于4度冰箱中 (6)如使用，用水浴加热溶解. 4.氯仿-异戊醇的配制： 配制方法(1)简单的体积混合，既要求比例为24：1即可 (2)储存于棕色玻璃瓶子中 (3)置于4度冰箱以便日后使用 5.去污剂： CTAB：可将细胞膜裂解，使DNA释放到提取液中，同时也使组织匀浆中的蛋白质变性. EDTA：能与DNase的辅助因子Mg2+结合，使DNase失去活性，不能降解从细胞中释放的DNA. 6.还原剂巯基乙醇：它抑制从细胞中释放的多酚氧仿.防止植物组织发黄变褐. 7.氯仿—异戊醇：它可把组织匀浆中变性的蛋白质除去，将DNA与细胞中的蛋白质、碳 水化合物等分开除去. 8.RNase：它可去除核酸中的RNA，只留下DNA. 9.硅珠悬浮液的配制 （1） 称取1.2g硅珠粉，溶解于10ml无菌水中. （2） 放入4℃冰箱备用. （3） 使用时先涡旋使其混合均匀 10. 10×TE，500ml配制如下： 将100mM Tris-Hcl（PH=8.0）6.057g与10mM EDTA（PH=8.0）1.8612g溶于400ddH2O中，调PH=8.0，定容到500ml。 11. 1×TE Buffer 组成浓度：10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0 配制量：500ml 配制方法：量取下列溶液于500ml烧杯中 1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml 0.5M EDTA PH=8.0 1ml 向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合；将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌；室温保存. 12. 聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE PAGE操作流程及注意事项： 1、涂胶 1）将有耳玻片（耳朝下）泡于反硅化剂中，新液25分钟，旧液30分钟. 2）涂无耳正面玻片硅化剂.均匀点四滴，轻而匀的沿一个方向涂三次，静10分钟. 3）到时间取出.打开通风橱风干30分钟. 2、封胶 1）将两玻片对贴于橡胶框中，放平，用力拧死，夹住橡胶管. 2） 溶废琼脂胶，分两次：第一次50秒，第二次10-20秒，防止沸出. 3） 用小细长枪头通透加胶枪头，便于加样通畅，少起气泡. 4） 吸2500-3000ul液胶加速沿玻片边缘快速顺下滴，将两面玻片充分封死，防止漏胶.以水平底线面水平高于底为佳，静止凝胶15分钟.（有时可先在封口加一点TBE以润滑玻片，利于胶流下） 3、灌胶 1) 用长细枪头透开加胶枪头 2) 从中间加入，每次不要全部打完，留一点在枪头内.防止断流而导致胶中含有气泡. 3) 插梳子时两端平整，梳子紧贴玻板，梳齿头部不可有气泡. 4) 拔梳子时先加一倍TBE液将梳子泡透，然后平行用力拔出. 5) 在插梳子15分钟内跟踪观察，适当下按，保证孔的深度. 6) 等待2小时，以便胶充分凝固. 4、吹孔 1） 向中间槽加入1倍粗制TBE，要淹没过内玻片约1厘米. 2） 拔梳子，小心平稳，均匀平衡. 3）调1000p枪到300-600ul，进行吹孔，将小孔内沉淀物吹打干净，加样中再视时吹5、加样 1） 用细长专用枪加入DNA 0.5ul. 2） 一手托另一臂的肘，以保证加样手不抖. 3） 一定垂直加到孔中去，不脱尾，不吸水，不靠壁，干净利落. 4） 加完一次.在放于桌旁的吸纸上，将细枪头上余液吸干. 5） 首、中、尾各留1到2个孔，两面胶孔的Marker不完全一样，以便区分. 6） 加Marker 0.