细胞工程重点2.docVIP

名词解释 生物工程：利用生物生产产品和新物种（新性状）。 细胞工程：在细胞水平生产产品和创造新物种、新性状。 动物细胞与组织培养：动物体内细胞与组织在体外培养、存活、增殖的技术。 原代培养：增值十代内的细胞培养。 传代培养：原代培养细胞转接到新培养基上培养。 细胞系：无限传代培养的细胞群。 贴壁型细胞：必须贴附在某固相表面才能生存、生长的细胞。 非贴壁型细胞：不须贴壁，可悬浮培养的细胞。 组织工程：人体组织细胞种植在生物支架上培养增殖，再移植到人体上，达到器官修复的技术。 干细胞：一类具有自我更新和分化潜能的细胞。 成体干细胞：成体组织内具有进一步分化潜能的细胞，是多能或单能干细胞。 胚胎干细胞：来源于早期胚胎或原始生殖细胞的可以分化成任意一种组织类型的全能性细胞。 细胞融合（体细胞杂交）：用人工方法使两个或以上细胞合并成一个细胞的技术。 多克隆抗体:针对不同抗原决定簇的单克隆抗体混合物。 单克隆抗体：由一种抗原决定簇刺激机体，由一个淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体。 不对称融合：利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再与另外一个完整的细胞进行融合。 胞质杂种：将两种来源不同的核外遗传物质（细胞器）与一个特定的核组合在一起的到的细胞。 细胞重组：从活细胞中分离出细胞器及其组分，在体外进行重新装配成为具有生物活性的细胞的一种技术。 胞质体：去除细胞核后由质膜包裹的无核细胞。 核体：与细胞质分离后得到的带有少量细胞质并包有质膜的细胞核。 克隆：指一种人工诱导的无性生殖方式或者自然的无性生殖方式。 克隆技术：将细胞核植入去核的未受精卵细胞中发育成胚胎后移植受体子宫，妊娠产出克隆动物的技术。 核移植技术：将细胞核移入同体或异体动物去核的成熟卵细胞内的技术。 单倍体：含配子染色体数目的个体 多倍体：体细胞含有大于等于3个相同染色体组的个体 染色体工程：增减、替换染色体来改变遗传性状 雌核发育：精子核进入卵细胞后消失，卵细胞核发育为胚胎 雄核发育：失活卵子与正常精子受精，用冷热休克法使精子核加倍，发育为父本形状二倍体。 微细胞介导转移： 染色体介导转移： 人工诱导雌核发育：人工诱导雌核发育是指用经过紫外线、X射线或γ射线等处理后的失活精子来“受精”，再在适当时间施以冷、热、高压等物理处理，以抑制第二极体的排除，使卵子发育为正常的二倍体动物3诱导融合高pH的高Ca离子诱导融合，PEG诱导融合。硝酸钠诱导融合特点是对原生物体无损害，但融合率低，一般小于4%；高pH的高钙离子浓度诱导融合容易，融合率可达10%；PEG融合的特点是成本低，异核率高，融合过程不受物种限制，但融合进程繁琐，PEG可能对细胞有毒害。 物理法：最常用的是电融合法，特点是融合率高，操作简便，易于控制，重复性强，对细胞伤害小。 融合细胞的筛选： 一般有两大类方法：根据遗传和生理生化特征的互补选择法；另一类是根据可见标记性状的机械选择法，最简单的方法是利用双亲细胞形态和色泽上的差异选择融合细胞。具体筛选方法有：①抗药性筛选系统 ②营养互补筛选系统 ③温度敏感突变型融合细胞的筛选 ④物理特性筛选法 ⑤荧光标记法 人工诱导单倍体的方法： 1、远缘杂交 2、延迟授粉 3、核置换 4、射线照射 5、花粉培养（最有效途径） 单倍体育种方法： 杂交F1代花药（XY）→花药培养为单倍体植株→秋水仙素→纯合二倍体（XXYY可育） 人工诱导多倍体的方法： 生物学方法：①胚乳培养 ②体细胞杂交 物理方法：①温度激变：冷休克（0—5℃）、热休克（30℃） ②水静压法：65kg/cm2高水静压，抑第二极体放出 ③机械创伤、电离辐射、高盐髙碱等 化学法：①细胞松弛素B（抑制细胞质分裂） ②秋水仙素：最有效、最广泛 ③PEG 异源多倍体：加倍染色体组来源于不同物种。 育种方法：先远缘杂交→杂交染色体加倍→新物种(人工创造) 小麦（ABD）×黑麦（R）→F1(ABDR)不育→秋水仙素加倍→小黑麦（AABBDDRR）可育 试管动物培养： 雌体超排卵治疗与卵子获得及成熟培养 雄性精子采集与体外优化处理 精卵体外人工受精 受精卵体外培养至胚胎（囊胚） 孕母受体选择与激素治疗处理（生理与胚胎同步） 胚胎移植 胚胎孕母子宫内发育 试管动物降生 单克隆抗体的制备： 动物免疫与免疫脾细胞制备 骨髓瘤突变缺陷细胞株的培养和选择 饲养层细胞培养 HAT选择培养基 细胞融合与杂交瘤筛选 单克隆抗体检测与鉴定 杂交瘤细胞克隆化培养 单克隆抗体的制备（体内接种法：血清法、腹水法。体外接种法） 细胞工程内容： ①动植物细胞与组织培养 ②细胞融合 ③染色体工程 ④胚胎工程 ⑤细胞遗传工程