色谱第8章色谱的定性和定量论述.ppt

2.4 定量方法 归一化法 定义 把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法称为归一化法，是一种相对定量方法。 前提 样品中的所有组分都能流出色谱柱，而且在检测器上所有的组分都能产生信号。 计算方法(加校正因子) * 优点 归一化法很直观，容易接受，计算简便、准确，当操作条件如进样量、流速等发生变化时，对计算结果的影响很小，是一种常用的计算方法。 缺点 校正因子的测定比较麻烦；必需所有组分都出峰 注意 主要用于GC的定量测定，当 fi相近时，可直接用峰面积归一化法。 HPLC中较少使用(常用检测器为非通用型检测器、不能忽略校正因子) * 外标法 外标法又可分为标准曲线法和外标一点法，是色谱定量分析中比较常用的一种方法。 属于绝对定量方法。 * 标准曲线法 用浓度—峰面积(峰高)绘制标准曲线，其斜率的倒数即为绝对校正因子，标准曲线应该是一条通过原点的直线。 * 特点 适合于大批量样品的分析 无需各组份都被检出、洗脱 需要标样(标准品) 标样及样品测定的条件要一致 进样体积要准确，重复性好 对样品前处理过程中待测组分的变化无法补偿。 * 外标一点法(单点校正法) 利用待测组分纯物质配制一个与待测组分含量相近的标准样(设量为ms)，在同一色谱条件下，分别将相同量的待测组分标样及试样注入色谱仪，出峰后，测量其峰面积(或峰高)，得相应的峰面积As和Ai * 外标一点法的应用前提 方法验证中，标准曲线通过原点 配制的标准样含量须与样品中待测组分含量相近 称量、配样均需非常准确 通常在连续分析大批量样品中使用 * 内标法 选择适宜的物质作为待测组分的参比物，定量加到样品中去，根据待测组分和参比物在检测器上的响应值之比和参比物加入量进行定量分析的方法。 * 待测组分(i)的量mi为： 设样品的总量为m，则待测组分i的质量分数为 * 内标法关键 选择合适的内标物 内标物的选择原则 内标物必须是原样品中不存在的物质，其性质尽量与待测组分相近(同系物、异构体) ； 内标物不能和被测组分起化学反应，要能完全溶于被测样品中； 内标物的峰尽可能接近待测组分的峰，或位于几个待测组分的中间，但必须和样品中的所有峰完全分离； 内标物的加入量应和待测组分相近。 * 内标法的特点 无归一化法的限制，即只要被测组分能出峰，不和其他峰重叠，不管其他组分是否出峰或是否重叠，都可以用内标法进行定量分析。 定量准确，受操作条件影响较小。 可部分补偿待测组分在样品前处理时的损失。 若加入几种内标物，还可提高定量分析的精度。 缺点 内标物的选择比较困难，同时内标物称量要求准确，操作麻烦。 * 标准加入法 是一种特殊的内标法 把待测组分的纯物质作为内标物加入到待测样品种 在相同的色谱条件下，测定加入待测组分纯物质前、后待测组分的峰面积（或峰高） 计算出待测组分在样品中的含量。 * 具体步骤 在确定的色谱条件下，测定样品中待测组分(i)的峰面积或峰高Ai(hi); 在第一步所用样品中准确加入已知量为△Wi的待测组分(i)，同样条件下测出峰面积或峰高Ai’(hi’)； 根据定量基本公式 mi=fi×Ai(hi)计算 * mi+△mi mi mi=fi×Ai(hi) (前) mi—原样品中待测组分(i)的量 mi+△mi=fi’ ×Ai’(hi’) (后) fi和fi’是同一组分在加入纯物质前、后两次测定的绝对校正因子,所以有 fi=fi’ * 标准加入法的特点 不需另外的标准物质做内标，仅需有待测组分的纯物质 进样量的准确性影响不大，操作简单 若在样品前处理之前就加入已知准确量的待测组分，则可完全补偿待测组分在前处理过程中的损失 要求加入待测组分前后两次色谱测定的色谱条件完全相同，才能保证两次测定时的校正因子完全相等 * 样品制备 前处理方法，转化率，溶剂，供试液储存 进样技术 与外标法关系密切，手动进样，阀进样 色谱条件 流动相流速，流动相组成，温度，柱效，色谱峰的对称性 检测器性能 线性关系，浓度型检测器，质量型监测器，灵敏度 分离度 大则影响小 2.5 影响定量分析结果准确度的因素 * 特异性(Specificity) 分析物定性的考察，是对所分析的特定样品产生特定信号 无干扰物(No Interference) 将样品中所有成分单独进样，在待分析组分附近不应有其它峰干扰。 精密度(Precision) 在相同的条件下，对同一试样进行重复测定时所得结果互相接近的程度。 2.6 方法