肌酸磷酸激酶同功酶CKMBDGKC速率法.docVIP

项 目 肌酸磷酸激酶同功酶（CK-MB） 方 法 DGKC速率法 目 录 1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清 3.3 试剂、校准血清的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 附录A: 参数 1. 检测原理 试剂中加入抑制CK-M的抗体，它能完全抑制CK-M亚基的活性而不影响CK-B亚基的活性，所得结果乘以2即得CK-MB的活性。 CK 肌酸磷酸 + ADP ----------- 肌酸 + ATP HK ATP + 葡萄糖 --------- 葡萄糖-6-磷酸 + ADP G6PDH 葡萄糖-6-磷酸 + NADP+------------ 6-磷酸葡萄糖酸 + H+ + NADPH 2．本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况。孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。 2.2 静脉采血： 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3 抗凝剂： 血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。 2.4 标本处理： 血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8保存。 3．试剂 3.1 试剂： 本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司CK-MB试剂盒，为液体双试剂，各组分如下： 组 成 R1:R2=4:1 混合后溶液的浓度 咪唑缓冲液: 100mmol/L PH=6.7 醋酸镁 10mmoll/L N-乙烯半胱氨酸（NAC） 20mmol/L EDTA 2mmol/L NADP 2mmol/L 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH） 1500U/L 己糖激酶（HK） 2500U/L 抑制CK-MM的人抗体 2000U/L 葡萄糖 20mmol/L 肌酸磷酸 30mmol/L 二腺苷-5-磷酸 10umol/L AMP 5mmol/L ADP 2mmol/L 3.2：校准血清 使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的CKMB校准血清。 校准频次： 空白定标：每日需做试剂空白定标。 全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。 3.3 试剂、校准血清的稳定性： 原包装试剂储存在2-8至标签所示失效日期。 18-22稳定28天，试剂应避免污染。当试剂空白吸光度高于0.5时，试剂按照失效处理。 CKMB校准血清在2-8储存至标签所示失效日期，复溶后-20保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。 4．仪器 KONELAB 30型号仪器。 性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。 5．操作 样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为速率法。参数见后附，附录A。 试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。 6．计算 ΔA/min×Vt×1000 CK-MB(U/L) = ----------------------------- = ΔA/min×F e×Vs×d 式中：ΔA/min—— 每分钟吸光度变化率； e —— 18.5 摩尔吸光系数； Vt—— 反应液总体积（ml）； d —— 1 比色杯光径（cm）； 1000—— 变化因数； Vs—— 标本体积（ml）； 7．操作性能 7.1 精密度： 批内CV0.55%，批间CV4.51%。 7.2 准确度： 检测结果的相对不准确度≤±10%。 7.3 灵敏度： 肌酸磷酸激酶同功酶浓度为：500U/L时，吸光度变化率ΔA340nm/min为0.054～0.066。 7.4 可报告范围： 血清与试剂用量之比为1:25时，测定上限为1000U/L。 7.5 特异性： 测量值在给定值的90%-110％范围内。 7.6 干扰： 内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。 8．参考值 0～24U/L 9．临床意义 肌酸激酶同工酶在诊断急性心肌梗塞时有特异性，结合心肌酶图谱，有助于心肌梗塞的诊断。在急性心肌梗塞胸痛发作后，血清CP