血红蛋白的取与分离.ppt

小结：样品处理和粗分离 1、红细胞的洗涤： 目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。 2、血红蛋白的释放： 在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放 3、分离血红蛋白溶液： 离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。 4、透析： 装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为7.0）透析。去除小分子杂质。 * 一、有关蛋白质的几个问题： 占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物 C、H、O、N 高分子化合物 氨基酸 R H C COOH NH2 1、含量　 2、组成元素 3、相对分子质量 4、基本组成单位： 结构简式： 种类： 8种必需氨基酸 12种非必需氨基酸 氨基酸 肽链 蛋白质 脱水缩合 盘曲折叠 （n条） 氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别 10、生理功能 细胞和生物体的结构物质，是人体发育和组织更新的主要原料，具有运输、调节、免疫、催化等作用，是一切生命活动的主要承担者 脱水缩合 5、氨基酸连接方式　 6、肽键　 7、分子结构 8、蛋白质多样性的原因： 9 、蛋白质的鉴定方法 CO NH ①氨基酸间脱水缩合时，原来的氨基和羧基就不存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一个氨基，另一端只有一个羧基（不计R基上的氨基和羧基）。所以任意一条多肽链至少应有一个的氨基和羧基。 ②若有个n氨基酸分子缩和成m条肽链,则可形成n-m个肽键,脱去个n-m个水分子，至少有氨基和羧基各 m 个。 11、相关计算 ③蛋白质可以含有一条或n条肽链、肽链间通过其它化学键（如二硫键）互相连接，具有不同的空间结构。 ④关于蛋白质相对分子量的计算：n 个氨基酸形成m条肽链，每个氨基酸的平均相对质量为a，那么由此形成的蛋白质的相对分子量为n·a- (n-m)·18 思考1 分离生物大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 思考2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 三、凝胶色谱法 1、概念： 2、原理： 又称分配色谱法，是根据相对分予质量的大小分离蛋白质的有效方法。 3、凝胶 ①性质：一些微小的多孔球体，球内含许多贯穿的通道； ②化学本质：多糖类化合物； ③实例：葡聚糖、琼脂糖等。 当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 相对分子质量较小 较长 较慢 相对分子质量较大 凝胶外部 较短 较快 4、具体过程 1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 2、作用： 能够抵制（ ）对溶液的（ ）的影响，维持PH基本不变。 外界的酸或碱 PH值 四、缓冲溶液 3、缓冲溶液的配制 通常由（ ）种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的（ ）就可以制得（ ）使用的缓冲液。 1－2 使用比例 在不同PH范围内 思考：说出人体血液中缓冲对？ NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3 / NaHCO3 1、概念：指带电粒子在电场作用下发生 迁移的过程。 五、电泳 2、原理：许多重要的生物大分子，如（ ）等都具有( ) 在( )下，这些基团会带