斑马鱼3种胰蛋白酶原基因的克隆、序列分析及组织表达.pdf

第52卷 第 1期 中山大学学报 (自然科学版) Vo1．52 No．1 2013年 1月 ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS SUNYATSENI Jan． 2013 斑马鱼3种胰蛋白酶原基因的克隆、 序列分析及组织表达 陈文波，李卫国，张 珍，焦春磊，吴 帆 (河南理工大学资源环境学院，河南 焦作 454000) 摘 要 ：胰蛋 白酶是丝氨酸蛋白酶类超家族成员之一，在动物蛋白消化中起着重要作用。为深入研究胰蛋白酶 在鱼类中的蛋白结构和生理功能，利用RT．PCR和 RACE方法，成功获得了斑马鱼3种胰蛋 白酶原 cDNA序列 (zflryla、zftrylb和zflry2)。结果表明，zftryla和zflrylb均有242个氨基酸残基组成，其中包括 15个氨基酸的信 号肽和5个氨基酸 (LDDDK)的激活肽。zflry2由247个氨基酸残基组成，其中包括 15个氨基酸的信号肽和9 个氨基酸 (APLGDDDDK)的激活肽。氨基酸序列比对结果显示，三者具备胰蛋白酶原的保守结构特征，如含有 催化三联体氨基酸 (His一57、Asp一102和Ser-195)，12个半胱氨酸，位于底物结合 口袋底部Asp一189和 口袋开 口 处的Gly一216、Gly一226等。进化树结果显示，斑马鱼 zflryla和zflrylb属于groupI，为阴离子胰蛋 白酶原；斑马 鱼zftry2属于groupII，为阳离子型胰蛋白酶原。RT—PCR结果显示，三者组织分布模式类似，且在肠中有最高表 达量。这些结果为研究鱼类胰蛋白酶原的基因进化和功能以及进一步探讨鱼类消化生理的分子机制奠定了基础。 关键词：斑马鱼；胰蛋白酶原；克隆；组织表达 中图分类号：Q785；$917 文献标志码 ：A 文章编号：0529—6579(2013)0l_0111—07 M olecularCloning，SequenceAnalysisandTissueExpression of ThreeFormsTrypsinogensin Zebrafish，Daniorerio CHEN Wenbo，LIWeiguo，ZHANGZhen，JIAO Chunlei， Fan (SchoolofResourceandEnvironment，HenanPolytechnicUniversity，Jiaozuo454000，China) Abstract：Trypsin，onememberoftheserineproteasefamily，playsimportantrolesinanimalproteindi— gestion．Itissynthesizedandsecretedasproenzymetrypsinogen，andremovedtheN-terminalactivation peptideby enterokinaseconvertingto activeform in the intestine．Theactivetrypsin can specifically cleavageatthepeptidebondonthecarboxylsideofbasicL-a·minoacidssuchasarginineorlysineresi．． duse．Forstudyingtheproteinstructureandphysiologicalfuntionsoftrypsinogeninfish，wesuccessfully gotthreetrypsinogencDNAs(zftryla、zftrylbandzftry2)fromzebrafishbyRT-PCRandRACE．The resultsshowedzflrylaandzflrylbconsistedof242aminoacidswhichcontainedasignalpeptide(SP)of 15aminoacidsandanactivationpeptide(AP)offiveaminoacids，LDDDK．z