灵芝规范化生产标准操作规程（SOP）.doc

灵芝规范化生产标准操作规程（SOP） 前言 本规程起草单位：广州中医药大学。 本规程主要起草人：徐鸿华、张桂芳（广州中医药大学）。 第一章 总则 1.1范围。 1.1.1本标准操作规程是灵芝生产和质量管理的具体操作方法。 1.1.2本规程适用于灵芝种植者进行栽培和管理。1.2引用标准。 1.2.1《中华人民共和国环境空气质量标准》(GB3095-1996）。 1.2.2《中华人民共和国农田灌溉水质标准》(GB5084-1992）。 1.2.3《中华人民共和国土壤环境质量标准》(GB15618-1995）。 1.2.4《中华人民共和国药典（一部）》（2005年版）。1.2.5《中华人民共和国食用菌卫生标准》(GB7090-1996）。 1.2.6中华人民共和国商务部《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》。 第二章 产地自然条件 2.1气温30℃、相对湿度90%、左右、空气中含0.1%二氧化碳、光照充足的条件下，灵芝可迅速正常生长发育。 2.2立地条件。土质疏松的沙质土壤。 2.3灵芝生长条件。菌丝生长前期以24~26℃生长较快，后期以24~28℃为好，菌丝体在木屑为主的栽培瓶中能耐受-10℃的短暂低温；子实体生长最适温度为25~28℃。菌丝生长阶段相对湿度维持60%为宜，子实体分化及发育期以相对湿度85%~90%为好。菌丝生长可在无光条件下进行，但全黑不能进行子实体原基的分化；子实体分化及发育要求散射光，且有趋光性。菌丝在基质中生长需要一定的氧；子实体分化与发育需要更多的氧气供应。菌丝体在PH为3.0~7.5的基质中可生长，但以PH6.0为最适宜。子实体适宜微酸环境。 2.4环境质量。 2.4.1水质达到《中华人民共和国农田灌溉水质标准》(GB5084-1992)二级以上标准。2.4.2环境空气达到《中华人民共和国环境空气质量标准》(GB3095-1996)二级以上标准。 2.4.3土壤环境质量达到《中华人民共和国土壤环境质量标准》(GB15618-1995)二级以上标准。 第三章 物种或品种类型 3.1本规程所适用的灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma.lucidum(Leyss.ex.Fr)Karst或紫芝Ganoderma.sinense.Zhao，Xu.et.Zhang的干燥子实体。 3.2菌种分离和培养。 3.2.1母种（一级菌种）分离培养。 3.2.1.1母液培养基配方马铃薯200g、葡萄糖20g、碟酸二氢钾(KH2PO4)3g、硫酸镁(MgSO4·7H2O)维生素B110~20mg，琼脂15~20g。配制：取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20min，滤去马铃薯块，将滤液补足1000ml。PH自然，装入试管，在1.47×105Pa灭菌30min,摆好斜面，冷却备用。 3.2.1.2母种分离。有寄主分离法、孢子弹射分离法和组织分离法。组织分离法：在无菌条件下，选取新鲜、菌蕾大、刚成熟尚未木栓化的子实体，先用清水洗净，然后用75%的酒精或冷开水冲洗药剂，用消毒的解剖刀切取菌柄和菌盖的内部，并将组织块切成黄豆大小约0.3cm的小块，接入试管培养基中央，放在28℃的阴暗条件下培养。 3.2.1.3母种生产。在无菌条件下接种，选择生长旺盛、菌龄短、菌丝层尚未出现色素分泌物的灵芝试管菌种用于转管培养。一般钩取黄豆大小菌块放入另一试管斜面培养基或三角瓶培养基中央。接种后放置24~26℃恒温箱或培养室中避光培养，接种后的前3天应每天对光检查试管中是否污染，弃去污染管，3天后隔天检查，菌丝长满斜面后即可使用。 3.2.2原种（二级菌种）生产。 3.2.2.1原种培养基配方。木屑73%、麸皮25%、蔗糖1%、石膏1%，将上述培养基粉充分拌匀后加水，使培养料的含水量达到65%，装入广口瓶或塑料薄膜袋，装瓶（袋）至瓶肩处，在料中心扎一锥形孔，封口。高压灭菌，1.5kg/cm22h，凉后接种。 3.2.2.2原种生产。一般原种用试管菌种。在无菌条件下接种，将消毒的接种铲从试管菌种斜面培养基前端插入，将试管表面革质化菌膜与培养基剥离，推到试管底部，露出带有菌丝的培养基，挑取玉米粒大小的一块菌种，放入原种培养基中央洞边或覆盖于培养基表面，将瓶（袋）封口，置于24~28℃下培养，培养30天左右，用于接种栽培种。 3.2.3栽培种（三级菌种）生产。 3.2.3.1栽培种培养基配方。用原种培养基配方或用杂木粒78%、麸皮20%、石膏1%、黄豆粉1%，将上述培养料充分拌匀后加水，含水量掌握在60%，PH5.5~6.0，将料装入菌袋中并且捣紧，要求上松下紧，装料至袋口3~5cm时，用捣木（直径1cm）在袋中央从上至下捣一孔洞，以利灭菌和菌丝蔓延，将袋口封好，在1.5kg/cm2压力下灭菌1.5h，凉后接种。 3