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医学微生物学实验综合性实验一 脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三） 空气、手指皮肤细菌学检查结果分析 菌落特征观察P11 细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时） 脓汁和粪便标本检验（录像） 肠道致病菌的分离与鉴定（录像） 油镜使用方法（讲解） 医院各类房间空气中细菌总数要求 细菌数分级 细菌总数/M3 病房类型 最低细菌数 ＜10 器官移植、心血管手术室、制剂室。 低细菌数 ＜200 无菌室或其他手术室、婴儿室、产 房、术后恢复室、供应室。 一般细菌数 200～500 普通病房、治疗室、放射科、按摩室。 ★注1：以上为世界卫生组织建议标准。 ★注2：我国卫生部要求，手术室、产房及婴儿室空气中细菌总数 不得超过500个/M3。 液体或固体标本菌落总数测定 可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。 分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内。 倾注46℃营养琼脂培养基大约15ml，混合均匀。琼脂完全凝固以后，37℃培养48小时。 选择菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。 将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)。 细菌在固体培养基中的生长现象 菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性. 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。 细菌的纯培养 挑选单菌落: 脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。 粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径2～3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径1～2mm。 选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落，进行接种。 安全警告 接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。 使用须知 显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作。 在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。 ★如果拿住载物台①和镜筒②等部位搬运的话，有可能会造成损坏。 显微镜各部件名称 开关与调整光强 开或关之前，必须将亮度调整旋钮②按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。 电源开关①拨到∣侧为开，拨到○侧为关闭。 按箭头方向转动亮度调整旋钮②变亮，相反方向转动则变暗。 放置标本 按箭头方向转动粗调旋钮②降下载物台。 按箭头方向拉开载物台标本夹③ ，自前向后将标本片放入平台，标本夹③ 轻轻放回原位。 转动上侧垂直移动杆④和下侧水平移动杆⑤，移动标本至光路中间。 载物台位置刻度 载物台上的刻度方便确定标本位置，标本移动后可以快速回到原位。 水平刻度的标识位置以机械载物台的①位置来读取。 垂直刻度的标识线以②的位置来读取。 聚焦 从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮①，使物镜③尽可能接近标本。一边看目镜，一边慢慢逆箭头方向转动粗调旋钮①， 使载物台下降。 看到标本以后，用微调旋钮②来正确对焦。★10倍物镜的工作距离（WD，从物镜到标本的 距离）为10.5mm。 ★油镜的WD为0.13mm。 调整瞳距 调整瞳距是调整双目间的距离，使两眼同时看到一个显微镜像，能防止观察时的疲劳。 方法：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右的视野一致。 标识●的位置表示瞳距。请记住自己的瞳距值，以便下次观察时调整。 调整屈光度数 调整观察者左右视力。 以右眼看右侧的目镜，旋转粗微调旋转盘，对好焦距。 以左眼看左侧的目镜，旋转屈光度调整环①，对好焦距。 调整聚光镜位置和孔径光阑 用聚光镜上下移动旋钮①，将聚光镜转到最上面。 在孔径光阑环②上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面。 转换物镜 旋转物镜转盘①，将希望使用的物镜（10倍、100倍）转到标本的上方。 100倍浸油物镜使用方法 油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。