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第七章检疫性植物病毒 2006.10.2 检疫性植物病毒的检验方法 番茄环斑病毒 马铃薯帚顶病毒 *其他检疫性植物病毒 南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环 斑病毒 检疫性植物病毒的检验方法 生物学检测技术 血清学检测技术 电子显微镜技术 分子生物学检测技术 1.生物学检测技术 原理： 植物病毒对鉴别寄主或指示植物的特异反应。 鉴别寄主谱： 对一种病毒有特殊反应的一组寄主，一般包括3～5种不同反应类型的寄主植物。一般包括： 系统侵染的寄主 局部侵染的寄主 不受侵染的寄主 例1，TMV和CMV在田间烟草植株上都呈花叶症，为了确定是否有TMV，或是将两者区分开，便可通过下列三种植物的接种来确定。 2.血清学检测技术 原理： 抗原与抗体的特异结合 方法： 免疫电泳和免疫电镜、琼脂双扩散、ELISA等。 琼脂双扩散反应沉淀线判断图 两种抗原相同，都与已知的抗血清反应 3.电子显微镜技术 原理： 以电磁波为光源，利用短波电子流，分辨率达到0.99?，比光学镜要高1000倍以上 4.分子生物学检测方法 分子杂交检测 PCR技术检测 分子杂交 在DNA和RNA之间进行，依据是RNA与互补的DNA之间存在着碱基的互补关系。 在一定的条件下，RNA--DNA形成异质双链的过程称为杂交。其中预先分离纯化或合成的已知核酸序列片段叫做杂交探针(probe)，由于大多数植物病毒的核酸是RNA，其探针为互补cDNA也称为cDNA探针。 植物病毒分子探针具专一性强、灵敏度高、准确快速等优点 分子探针的长度一般在500～1500核苷酸碱基对（bp） 常用广谱分子探针，即包括多个不同专化性基因的核苷酸片断。 PCR技术检测 检疫性植物病毒的检验方法 番茄环斑病毒 马铃薯帚顶病毒 *其他检疫性植物病毒 南方菜豆花叶病毒、可可枝肿病毒、香石竹环斑病毒 番茄环斑病毒Tomato ring spot virus 分布： 1936年，美国东部新泽西发生ToRSV至今已有30多个国家和地区发现有该病毒，主要集中在北美温带地区，即美国和加拿大。 寄主： ToRSV寄主范围广，包括双子叶和单子叶植物的35个科，自然界，ToRSV主要侵染木本植物，草本及观赏植物。 危害情况： 1975年，ToRSV侵染加拿大安大略的地区葡萄，产量损失76％～95％，甚至造成绝产。同年，ToRSV 侵染后，纽约葡萄严重减产，奥尔良悬钩子果实减产21％～50％。 症状： 番茄症状（番茄环斑病） 枝条卷曲和坏死，嫩叶、叶柄生褐色坏死环和波纹，果实受侵染，外表产生环斑，灰色到褐色栓皮 葡萄上的症状（葡萄黄脉病） 叶黄脉、斑驳、环斑，节间缩短呈莲蓙状丛生，植株严重矮化，果实败育变小，至绝产，几年内植株渐渐坏死。植株剥皮后，可见增厚的海绵状韧皮组织及坏死凹陷 苹果上的症状（apple union necrosis and decline） 砧木和接穗接合部肿胀，裂开，剥开树皮，树皮内侧变厚，多孔，愈合斑连接处有不明显的线，在这条线相对方向的形成层表面也有一类似的线，沿着这条线有一小的深沟或一条光滑的细缝，坏死的树皮覆盖在沟或缝上。 叶变少，变小，黄化，嫩枝呈束状丛生，果实较小，果皮颜色加深。树皮颜色淡红 桃树和李属其它树种上的症状（桃树黄芽花叶）：沿中脉产生扁椭圆形羽缘状病斑，由灰绿色变为浅绿色，芽发育成为小而变形的丛生叶，成浅黄色而死亡。 （桃树茎痘病）：树皮变厚，发软，海绵状，剥开树皮，树干上出现凹陷的痘斑和沟槽。叶片褪绿，叶芽发育推迟，落叶提前，果实畸形，果味变异，提前成熟和脱落。 复盆子上的症状：侵染当季不表现症状，第二年叶片表现黄色斑驳，条纹或脉褪绿，叶片生长推迟，病株表现不结果或形成易碎果 悬钩子上的症状：植株矮化，小果并减产，幼龄植株叶片出现褪绿环斑。第二年，叶片症状不明显，但新叶出现偏上性，早落。第三年有10％～80％的果枝死亡。 病原： 番茄环斑病毒 学名? Tomato ring sopt virus （ToRSV） 异名 ?烟草环斑病毒2号 Tomato ring spot virus No.2 烟病毒13号 Nicotiana virus 13 桃黄芽花叶病毒 Peach yellow bud mosaic virus 葡萄黄脉病毒 Grape yellow vein v