食品毒理学实验详细资料整理.pptVIP

实验动物处置 (1)生物标本采集 在实验过程中常需要对生物样品如血液、尿液、胆汁、粪便等进行检测或检查，它们是反映受试物的生物学效应和物质在体内代谢情况的最重要途径。 血液采集 大小鼠如需血量小可用鼠尾采血，如需血量较多可用眼眶静脉丛采血或处死时股动脉放血采血。 狗可用后肢隐静脉抽血。 不影响动物生理功能的最大取血量为其总血量(50ml/kg体重)的10％。 实验动物处置 (1)生物标本采集 尿液采集 对大小鼠可用代谢笼法，下部有粪尿分离器。 对狗可用接尿法或导尿法。 胆汁采集 直接插管至胆总管采集 粪便采集 对大小鼠可用代谢笼法，下部有粪尿分离器，分析前剔去表层。 实验动物处置 (2) 安死术及其操作方法 安死术是指用公众认可的、以人道主义的方法处死动物的过程，即达到没有惊恐或焦虑而安静地、无痛苦地死亡。安死方法最重要的标准是应具有保证动物中枢神经系统立即大道失去痛觉的早期抑制作用。应尽量采用适当的处死方法，减少实验动物的痛苦。 大小鼠可用颈椎脱臼法（脊髓与脑髓拉断），然后股动脉放血，动物立即死亡。 兔、豚鼠、狗等一般用股动脉放血处死，或向静脉内注射一定量的空气使之发生严重的血液循环障碍的空气栓塞法。 化学药物致死法均适合。 实验动物处置 (3) 病理解剖和标本留取 毒性病理学检查包括大体解剖和组织病理学检查两部分。急性毒性试验中在试验期中死亡或试验结束处死的动物都应进行尸体解剖，因为急性毒性试验的目的是得到有关可能的靶器官信息以及进行重复染毒试验剂量设计的信息。 4.2 食品毒理学试验的设计原则 试验设计(experimental design)是指为试验研究制定出一个通盘的、周密的、安排合理的、科学性强的设计方案，将试验对象随机分配到两个或多个组中，对试验对象施加某种干预或处理因素，观察比较不同处理的效应。 食品毒理学试验包括体内试验和体外试验两种。 体内试验是以实验动物为模型，通过外源化学物对实验动物的毒性反应，向人（原型）外推，以期评估外源化学物对人的危害及危险性。 体外试验则主要用于筛选和预测急性毒性和机制研究。 毒理学实验能否获得预期结果，试验前的试验设计至关重要。 科研设计遵循的三原则：随机、重复、对照。 4.2.1 体外试验设计 1 溶剂/赋形剂 所用溶剂/赋形剂不应与受试物发生化学反应。推荐使用溶剂/赋形剂。 2 受试物 了解受试物各方面性质，测定受试物在试验介质中的溶解性。溶解性限度就是出现沉淀的最低浓度。 3 受试对象 4 剂量设置 5 代谢活化 代谢活化系统的选择和条件依赖于受试物的类别。 6 对照 未处理（空白）对照、阳性对照、阴性对照 7 重复 由质控良好的实验得到明确的阴性结果和阳性结果，不强调要求重复。可疑结果则应重复实验。 4.2.2 体内毒理学试验设计 1 实验动物 动物选择，首选实验动物是其对受试物的代谢过程、生理反应和生化特性基本上与人接近的。 动物数量，各组各组动物数的设计应考虑到统计学的要求。 2 受试物 资料、处置、给予方式 4.2.2 体内毒理学试验设计 3 对照 对照条件 对照类型 未处理（空白）对照（必要时设）：对照组不施加任何处理因素，不给受试物也不给以相应的操作。 阳性对照（必须设）：用已知的阳性物(如致突变物)检测试验体系的有效性。如在遗传毒理学试验、致畸试验和致癌试验中用已知的致突变物、致畸物或致癌物染毒，应该得到肯定的阳性结果(即致突变性、致畸性或致癌性)。 阴性对照（尽可能设）：不给处理因素但给以必须的实验因素(溶剂／赋形剂)，以排除此实验因素(溶剂／赋形剂)的影响。没有阴性对照组就不能说明受试物染毒与有害作用之间的关系。 历史性对照：由本实验室过去多次实验的对照组数据组成。 4.2.2 体内毒理学试验设计 4 剂量分组 一般至少要设3个剂量组(即高剂量组、中剂量组、低剂量组)。 一般要求，高剂量组应出现明确的有害作用，或者高剂量组剂量已达到染毒的极限剂量(如大鼠或小鼠灌胃或注射的最大容量)。 低剂量组应不出现任何可观察到的有害作用(即相当于NOAEL)，但低剂量组剂量应当高于人可能的接触剂量，至少等于人可能的接触剂量。 中剂量组的剂量介于高剂量组和低剂量组之间，应出现轻微的毒性效应(即相当于LOAEL)。 5 观察指标 指标的有效性、客观性、准确度和精密度、灵敏度、特异性、选择指标的数目、指标的标准化 4.2.2 体内毒理学试验设计 6 试验期限 某些试验(如致畸试验和多代生殖试验)的试验期限是由受试实验动物物种或品系而决定的。而其他毒性试验的期限在某种程度上由定义所决定。 7 试验设计常用方法 完全随机设计 配对设计 随机区组设计 析因设计 拉丁方设计 4.3 毒理学实验结果处理和分析 在评价毒理学试验的结果时，应综合考