食品卫生六沙门氏菌检验二.pptVIP

实验六 沙门氏菌检验（二） 一、实验器材（每组的量，由班长分发） 赖氨酸脱羧酶培养基试管： 5支/组 对照培养基试管（不加赖氨酸）：1支/组 尿素琼脂培养基斜面：3支/组 蛋白胨水培养基试管：6支/组 余下的作为空白 实验前准备：（尿素）琼脂培养基融化后冷至50 ℃ ～55 ℃，加入经过滤除菌的尿素溶液（10ml尿素溶液/100ml培养基），分装于灭菌试管内（约3～4ml/管），放成斜面。 二、实验步骤 首先标记挑取的可疑菌落产H2S是“＋ ”还是 “ － ” 1.赖氨酸脱羧酶试验 挑取可疑菌落，接种赖氨酸脱羧酶培养基试管（包括对照培养基），每人接种一支， 36 ℃ ± 1 ℃ ，培养18h～24h 2.尿素酶试验 挑取可疑菌落，接种三支尿素琼脂斜面，36 ℃ ± 1 ℃ ，培养24h 3.吲哚试验 挑取可疑菌落，蛋白胨水试管每人接种一支，36 ℃ ± 1 ℃ ，培养1d～2d 三、实验结果 1.赖氨酸脱羧酶试验 赖氨酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色； 阴性者因葡萄糖产酸，培养基变为黄色。 对照管应为黄色 2.尿素酶试验 尿素酶阳性者由于产碱，培养基变为红色。 3.吲哚试验（蛋白胨水试管） 加入数滴乙醚，摇动，静置；沿管壁徐徐加入欧-波试剂 （吲哚试剂）数滴，在乙醚和培养物之间产生红色环状物 为阳性反应。 反应序号A2： 补做甘露醇和山梨醇试验，按下表判定结果： 反应序号Bl： 补做ONPG。若ONPG（＋），为大肠埃希氏菌，若ONPG（－），为沙门氏菌。同时，沙门氏菌应为赖氨酸（＋），但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸（－）。 * 赖氨酸脱羧酶试验 从左往右依次为 对照、阳性（紫）、阴性（黄） 三糖铁 TSI Urease Test 尿素酶试验： urea尿素 ammonia氨 Indol test 吲哚试验 tryptophan色氨酸→indole吲哚→玫瑰吲哚 ↑ Kovacs reagent吲哚试剂 （对二甲基氨基苯甲醛） - + E.coli 蛋白胨水试管 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2003 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品 前增菌法 25g＋BPW225mL 36 ℃ ± 1 ℃ 一般4h，干蛋品18h～24h 10mL＋MM （或TTB）100mL 10mL＋SC100mL 直接增菌法 25g＋灭菌生理盐水25mL 检样匀液25mL ＋MM （或TTB）100mL 检样匀液25mL ＋SC100mL BS DHL（或HE、WS、SS） TSI（排除A/A H2S－结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸 H2S＋ 靛－ 尿－KCN－ 赖＋（或一项不符） 沙门氏菌血清学试验 甘露醇 山梨醇 H2S＋ 靛＋ 尿－ KCN－ 赖＋ H2S－ 靛－ 尿－ KCN－ 赖＋/－ 非如左述的各种反应结果 沙门氏菌血清学试验 ONPG － 沙门氏菌 非沙门氏菌 42 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h 42 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h 36 ℃ ± 1 ℃ 40h～48h 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h * 必要时作生化群的鉴别（卫，山，水杨苷，ONPG，丙，氰） * 必要时作生化群的鉴别（卫，山，水杨苷，ONPG，丙，氰）