诊断用酶的研究进展.doc

诊断用酶的研究进展 2010-03-07 08:55:39 来源: 作者: 【大 中 小】 浏览:22次 评论:0条 酶试剂方法中决定试剂质量的关键是工具酶的质量，而工具酶的生产工艺又是决定其质量和产率的关键因素，因而国内外学者付出了辛勤的劳动，力求选育高产菌株(包括构建基因工程菌)，探索最优化的发酵工艺和后提取纯化技术，以提高酶的产率，保证原酶质量。工具酶的发酵生产和纯化技术涉及微生物工程、酶工程和分子生物学工程领域的专门知识和技术经验，需精密仪器设备，具技术垄断的特点，技术难度相当大。为便于诊断用酶研究生产和临床化学工作者了解医学检验诊断试剂中工具酶的研究现状和进展，现将近10年来有关技术资料作一综述，以供参考。 1　诊断试剂新工具酶的菌种选育和生产工艺研究十分活跃 　　诊断试剂工具酶的研制是酶制剂工业中的一个小的属枝，同工业用酶相比较，其对底物的专一性更严格，纯度要求高，但用量有限，不易形成很大的生产规模。可喜的是，近10年来一些技术条件较优越的科研院所，很重视这一领域的开创性研究工作，有十几种医学检验中急需的工具酶已经培育出产酶菌株，掌握了发酵制备及酶提纯工艺，并对酶的理化性质作了必要的研究，为解决这些工具酶的国产化生产产提供了技术保证。表1列举了近10年来报道的若干项重要诊断试剂工具酶研究的国内外文献资料，并对这些酶的菌种来源、分布特点、主要用途、工艺技术完善程度及主要技术创新等进行简要的述评。 表1　　近10年来国内外研制成的诊断试剂工具酶 工具酶名称 来源 分布 主要应用价值 工艺技术完善程度及主要创新特点 文献来源 脲酶 普通变形杆菌 胞内 血清尿素测定试剂盒 经30 L发酵罐放大培养，优化发酵条件 ［1］ 脲酶 芽胞杆菌 胞内 血清尿素测定试剂盒 经摇瓶发酵培养用尿素诱导提高产率 ［2］ 脂酶 皱落假丝酵母 胞外 血清TG测定试剂盒(对TG水解完全) 经摇瓶培养，使用疏水层析技术分离 ［3］ 葡萄糖氧化酶 点青霉AS.3.3871 胞外 血葡萄糖测定试剂盒 经38 L发酵罐放大培养，使用超滤技术等 ［4］ 已糖激酶 面包酵母 胞内 肌酸激酶测定试剂盒 使用细胞溶涨、冻溶超声粉碎技术 ［5］ 胆红素氧化酶 疣疱漆斑菌 胞外 血清胆红素测定试剂盒 优化发酵条件，100 ml摇瓶培养 ［6］ 胆红素氧化酶 疣疱漆斑菌 胞外 血清胆红素测定试剂盒 摇瓶培养，菌种经紫外线诱变，提高产率 ［7］ 谷氨酸脱氢酶 天津短棒菌T6-13 胞内 血清尿素测定连续检测法试剂盒 对菌种进行诱变处理及摇瓶培养 ［8］ 脂肪酶 猪胰 胞内 血清TG测定试剂盒 酶理化性质及应用研究较为深入 ［9］ 乳酸氧化酶 粪链球菌 胞内 乳酸测定试剂盒 加入Tritonx-100破壁效果好 ［10］ 胆固醇酯酶 假单孢菌 胞外 血清胆固醇测定试剂盒 使用超滤分离技术等 ［11］ 胆固醇氧化酶 节杆菌82菌株 胞外 血清胆固醇测定试剂盒 产酶条件及后提纯工艺优化 ［12］ L-谷氨酸氧化酶 放线菌P-26 胞外 血清rGT测定试剂盒 优化产酶条件 ［13］ 谷氨酸脱氢酶 猪肝 胞内 血清尿素测定试剂盒 纯化工艺及酶稳定性研究 ［14］ 甘油激酶 嗜热脂肪芽孢杆菌 胞内 定量检测甘油试剂盒 应用SIPI-Ⅱ蓝色染料配基层析等分离技术 ［15］ α-磷酸甘油脱氢酶 兔肌 胞内 血清甘油三酯酶偶联试剂盒 建立了液-液双水相提取新技术等 ［16］ 甘油氧化酶 日本曲霉AT008 胞内 血清TG测定试剂盒 发酵罐放大培养 ［17］ 甘油氧化酶 青霉Ts-622 胞外 血清TG测定试剂盒 麦麸固体培养 ［18］ 甘油磷酸氧化酶 气球菌属变异株 　 血清TG测定试剂盒 优化培养条件 ［19］ 胆固醇氧化酶 红球菌属 胞外 血清胆固醇测定试剂盒 优化培养和分离条件 ［20］ 肌酸酶 基因来自黄杆菌sup-188 　 肌酸、肌酐测定试剂盒 构建成基因工程菌并完成基因表达 ［21］ 肌酸酐酶 基因来自假单孢菌属sp.ps-7 　 肌酐测定试剂盒 构建成基因工程菌并进行表达 ［22］ 　　分析上述文献资料，对当前诊断试剂工具酶研究发展趋势可以得出以下几点印象：1.1　通过诱变技术和底物诱导作用等方法，选育出稳定、高产的优良菌株是决定微生物发酵工程成败的关键所在。这对常规发酵生产或进行基因工程菌的构建都是如此。而培育出一种价值很高的目的菌株，是一种能够产生高效益的重大科技创新，应给予重视和支持。1.2　寻找产生胞外酶的菌种，能为酶的提取纯化(下游工程)提供极大的便利。因为胞内酶分离中遇到大量菌体蛋白的干扰，使分离纯化程序复杂化，加大了目的酶的损失。而胞外酶无需破碎细菌细胞，