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人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 * * 免疫学检验 第十四章 沉淀反应 沉淀反应的概念及特点。 液相内沉淀试验的原理及种类。 凝胶内沉淀试验的原理及种类。 双向琼脂扩散试验的应用。 凝胶免疫电泳技术的种类及原理。 沉淀反应方法的技术要点、影响因素及临床应用。 本章要点 目　录 液相内沉淀试验 1 凝胶内沉淀试验 2 凝胶免疫电泳技术 3 沉淀反应（precipitation ) 可溶性抗原与相应抗体发生特异性结合，在适当条件下而出现的沉淀现象。 多克隆抗体可与抗原表面多个不同的表位结合，容易与多个抗原交联成网状结构而发生沉淀，而单克隆抗体只与抗原表面的一种表位结合，不易形成交联，故不适用于免疫沉淀试验。 前 言 1.液相内沉淀试验 环状沉淀反应、絮状沉淀反应、免疫比浊度分析。 2.凝胶内沉淀试验 单向琼脂扩散试验、双向琼脂扩散试验。 3.凝胶免疫电泳技术 对流电泳技术、免疫电泳技术、火箭电泳技术、免疫固定电泳技术。 沉淀反应分类 环状沉淀试验：抗原溶液叠加在细玻璃管内的抗体液面上，二者在两液面交界处形成白色沉淀环。 絮状沉淀试验：可溶性抗原、抗体在液相中特异性结合，形成絮状沉淀物。 免疫比浊度分析：透射、散射和免疫胶乳比浊法，应用于自动化。 第一节 液相内沉淀试验 指可溶性抗原、抗体在含有电解质的凝胶内自由扩散形成浓度梯度，二者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。根据抗原与抗体反应的方式和特性，可分为单向琼脂扩散试验和双向琼脂扩散试验。 第二节 凝胶内沉淀实验 抗体与待测的抗原,在两者比例合适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原的浓度成正相关。 本法稳定、简便、无需仪器设备。重复性和线性均可信，但灵敏度稍差、耗时长、影响因素多。 一、单向琼脂扩散试验 （平板法） 单向免疫扩散试验 将抗原抗体分别加在琼脂糖凝胶不同的对应孔中，两者在凝胶中自由扩散，在比例合适处形成白色沉淀线。沉淀线的位置、形状以及对比关系，可进行定性分析，如抗原或抗体的存在与否、相对含量估计、相对分子量分析和性质分析。 本法操作简单、特异性高、结果可靠、成本低廉，但灵敏度低，耗时长，不能精确定量。 二、双向琼脂扩散试验 （平板法） 1.抗原或抗体的定性分析。 2.抗原、抗体的相对分子量和相对浓度的估计。 双向琼脂扩散试验应用 A：Ag、Ab浓度及分子量近似；B ：Ag、Ab浓度近似，分子量Ag＜ Ab； C：Ag、Ab浓度近似，分子量Ag＞ Ab ； D：浓度Ag ＞ Ab，分子量近似； E：浓度Ag ＞ Ab，分子量Ag＜ Ab；F：浓度Ag ＜ Ab，分子量Ag＞ Ab 抗原完全相同 抗原部分相同 抗原完全不同 3.抗原性质的分析 4.抗体效价的测定 5.抗原或抗体纯度的鉴定 电泳分析与沉淀反应的结合产物，即可溶性抗原和抗体在直流电场的作用下，在凝胶内加速定向泳动，彼此相遇而特异性结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。该技术提高了沉淀反应的速度和敏感度，广泛用于临床实验诊断和科学研究。 第三节 凝胶免疫电泳技术 无沉淀线出现表明无相应的抗原。 沉淀线位于抗原抗体孔中间，说明两者比例较适合。 沉淀线偏向抗原孔一方，表示抗体浓度＞抗原，反之，则是抗体浓度＜抗原浓度。 一、对流免疫电泳技术 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 人民卫生出版社 *