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白细胞检验
白细胞检验 第一节 白细胞生理概要 外周血常见白细胞的种类与功能 白细胞的寿命和归宿 学习目标 1.叙述白细胞显微镜计数法的原理、试剂组成、注意事项 2.学会白细胞显微镜计数法的操作方法 3.准确识别外周血常见正常和异常白细胞形态 4.学会白细胞分类计数方法 外周血常见白细胞的种类与功能 (一)外周血常见白细胞的种类 1.白细胞的形态: 无色有核,球形,直径7μm~25μm。 2.白细胞的种类(形态分类): 三类五种-------- 中性粒细胞(N) 粒细胞 嗜酸粒细胞(E) 嗜碱粒细胞(B) 白细胞 淋巴细胞 (L) 单核细胞 (M) 白细胞的发育 起源于骨髓多能造血干细胞。 白细胞的功能 中性粒细胞:具有较强的运动能力和吞噬活性。胞内酶有复杂的杀菌系统。 嗜酸粒细胞:可作变形运动,吞噬抗原抗体复合物,灭活组织胺减轻过敏反应。 嗜碱粒细胞:与IgE具有较强的结合力,脱粒释放组胺导致速发性变态反应。 淋巴细胞:参与体液免疫和细胞免疫。 单核细胞:有强大的吞噬功能,传递抗原信息。 白细胞的寿命 粒细胞: 10~15天 淋巴细胞:数天~20余年 单核细胞:数月 白细胞的归宿 衰老的粒细胞被单核-吞噬细胞系统清除,也有一部分从口腔、气管、消化道和泌尿生殖道排出。 B淋巴细胞经抗原刺激后分化为浆细胞,产生特异性抗体,参与体液免疫。T淋巴细胞经抗原致敏后,可产生多种免疫活性物质,参与细胞免疫。 粒-单核系祖细胞在骨髓经分化成原始单核细胞后发育为成熟单核细胞,释放入血液。 学习目标 1.叙述白细胞显微镜计数法的原理、试剂组成、注意事项。 2.学会白细胞显微镜计数法的操作方法 3.准确识别外周血常见正常和异常白细胞形态。 4.学会白细胞分类计数方法。 显微镜计数法 【原理】 用白细胞计数稀释液,将血液稀释一定倍数并破坏红细胞后,混匀充入计数池中,在显微镜下计数一定容积内的白细胞数,经换算即可求得每升血液中白细胞的总数。 显微镜计数法 【器材】 1.显微镜(目镜10×;物镜10×) 2.微量吸管(Hb吸管) 传统的Hb吸管玻璃上有10μl和20μl(误差<±1%)两个刻度。使用前应经严格校正。橡胶乳头提供负压 Hb吸管的消毒清洗 每次使用后,应经2g/L过氧乙酸浸泡2h消毒。然后依次用蒸馏水冲洗,→0.95L/L乙醇除脂脱水,→乙醚干燥后,才能再次使用。注意清洗的顺序不可颠倒。 显微镜计数法 3.计数池 显微镜计数法 3.计数池 各池刻划有9mm2面积的刻度,分为 9个大方格,每格长、宽各1mm,面积1mm2,体积为 0.1mm3,容量 0.1μl。 计数白细胞的四个大方格 四个角的大方格都用单线划分为16个中方格,为计数密度小的(白)细胞用。 容量: 0.1μl/大方格 计数红细胞的五个中方格 中央的一个大方格,用双线划分为25个中方格,每个中方格又被单线划分为16个小方格,共有400个小方格,供计数密度大的(红)细胞用。 容量: 0.1μl/大方格 0.004μl/中方格 4.盖玻片 特制的计数池专用盖片,要求玻璃表面平整光滑,有一定重量,不被细胞悬液所抬浮,厚度应为0.4mm~0.7mm。盖玻片两面的平整度是:0.002mm以内, 大小: 24mm×20mm×0.6mm。 显微镜计数法 【试剂】 白细胞稀释液 冰乙酸 2.0ml 10g/L亚甲蓝(或结晶紫)数滴 蒸馏水加至100ml 稀释液中各组分的作用 蒸馏水— 低渗溶解红细胞, 乙 酸— 可加速红细胞溶解,同时乙酸能固定核蛋白,使白细胞核显现,便于辨认。 染 料— 使核略着色,且易与红细胞稀释液 区别。 显微镜计数法 【操作】 1.取小试管1支,加入白细胞稀释液0.38ml。 2.用微量吸管准确吸取外周血20ul。 3.擦去管尖外部余血,立即将吸管插入盛有稀释液的试管底部,轻轻将血放出,并吸取上清液漱洗吸管2次~3次,注意每次不能冲浑稀释液,最后用手振摇试管混匀。 操作 4.充液 将计数板和盖玻片擦净,盖片盖在计数池上,用毛细滴管或玻璃棒取已混匀的细胞悬液1滴,充入计数池与盖玻片间的缝隙中,静置2min~3min,待白细胞下沉。 镜下白细胞形态 似成熟蚕卵,中央核深染,胞质色
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