农残分析7可见紫外分光光度法.ppt

(二)可见比色分析 可见比色分析法就是吸收光谱在可见光范围内的分光光度法。可见光波长范围是由紫色的400nm到红色的760nm。 随着分光光度计的发展，比色测定已由分光光度计代替了旧时的比色计。分光光度计与比色计相比，具有准确、省时、选择性好的优点，现代的分光光度计都具有扫描功能，可以通过吸收曲线，找出被测物质的最佳吸收波段，还可以从吸收曲线上选择合适的条件，以减少杂质的干扰。 农药的可见光比色分析有以下几种情况： 农药有效成分本身带有颜色，可以直接进行比色，这种农药数量很少，如敌克松原药为黄棕色，在波长435nm处有最大吸收峰。故可直接进行比色测定。 农药本身无色，经化学反应，引入或生成一个显色基团而变成有颜色的化合物，此过程称为“显色”，大多数农药都需要显色，才能进行测定。 (1)经化学反应可以生成有色化合物，如对硫磷经碱解后形成对硝基酚而呈黄色。五氯酚经氧化形成四氯代苯醌呈黄色。 (2)引入显色基团生成有色化合物：如农药经酸、碱水解产生酚类或芳胺，可与偶氮试剂进行偶合形成有色化合物，偶氮试剂则称为显色剂。 1．含氯农药的颜色反应 (1)吡啶—碱显色反应(Fujiwara反应) 含卤素农药在碱性溶液中，与吡啶短时间加热，至少有两个卤原子和一个碳原子成键，产生红色或蓝色。 如DDT与含有呫啐酚的吡啶溶液及氢氧化钾加热生成红色。可在510 nm处测定光密度。 三氯杀螨醇在碱性条件下，水解产生氯仿，氯仿在碱—吡啶作用下生成红色，可在535nm处测光密度。氯丹可以产生紫色(404nm)，毒杀芬可产生黄色(400 nm)，七氯、克菌丹、敌敌畏等都有此反应，反应过程中，含有水或乙醇对颜色形成有干扰。 (2)硝化—甲醇钠法；含氯芳香族农药，经硝化后加甲醇钠，形成四硝基衍生物，经分子重排变为醌式，呈蓝色。如对位DDT、对位DDD及三氯杀螨醇形成蓝色(598nm)；DDE，DDA形成红色（420nm），邻位DDT形成紫色(590－511nm)。 六六六需加碱水解成l，2，4三氯代苯再经硝化与甲醇钠反应形成6氯2，4二硝基间苯二酚，呈黄色，可在415nm处测定光密度。 (3)脱氯磺化显色反应： DDT，甲氧 DDT等在1％乙醇氢氧化钾镕液中，脱掉一分子氯化氢，再与浓硫酸反应，即呈现颜色，DDT为桃红色；甲氧DDT为紫色。 (4)二苯胺—氯化锌显色反应： 狄氏剂、毒杀芬等经与二苯胺、氯化锌混合熔融，而形成蓝绿色化合物，将此化合物用丙酮或冰醋酸溶解，即可进行比色。 (5)浓硫酸与铬变酸显色反应； 卤代苯氧乙酸类与浓硫酸反应产生甲醛，再与铬变酸(1，8二羟萘、3，6二磺酸)加热到150℃出现紫色。 2．含磷农药的颜色反应 (1)钼蓝比色法测全磷： 含磷农药用高氯酸及硫酸混合液，消化分解成无机磷，在酸性条件下与钼酸铵及偏钒酸铵反应形成磷钼杂多酸，显黄色，在420 nm处测定光密度。 PO33－＋12MoO42－＋3NH4＋＋24H＋ →[(NH4)3·PO4·12MoO3]＋12H2O 如在钼酸铵中加入1氨基—2萘酚—4磺酸试剂或SnCl2则显蓝色，在735nm处测定光密度，所有有机磷农药均可用此法测定全磷含量。 (2) 4－(对硝基苄基)吡啶(NBP)反应： 有机磷农药在乙醇中与4—(对硝基苄基)吡啶在100℃加热12—17min，冷却后加入四乙撑戊胺丙酮液(或吗啉丙酮液)30 min呈蓝色，在580 nm处测定光密度。此法可测定马拉硫磷、乐果、倍硫磷等含硫或不含硫有机磷农药。 (3)皂化比色法： 含硝基有机磷化合物，碱解后，产生对硝基苯酚化合物，呈黄色，可在420－480nm波长范围内测光密度。如对硫磷、甲基对硫磷、杀螟松均可用此法测定。 (4)与氯化钯反应： 含硫磷酸酯类在酸性条件下与氯化钯反应形成黄色或褐色螯合物。二硫代磷酸酯形成1∶1螯合物，一硫代形成1∶2螯合物。 (5)形成铜盐络合物： 二硫代磷酸酯类，在碱性条件下，水解成二烷基二硫代磷酸，与铜离子在