临床病原体检测__培训课件.ppt

临床病原体检测 云南省第一人民医院 毛小琴 教学目的要求 了解细菌耐药的产生机制 熟悉临床感染常见的病原体检测方法 掌握临床常见病原体的标本采集和运送 主要教学内容 感染的变迁及当前感染的情况 细菌的耐药性及耐药机理 临床关注的耐药菌的监测报 临床标本采集注意事项及细菌培养的报告制度 感染的变迁及当前感染的情况 疾病谱的变迁（G染色阳性菌为主→G染色阴性菌为主） 新传染病的陆续出现（如：嗜肺军团菌，SARS冠状病毒） 一些已绝迹的老传染病死灰复燃（如：梅毒、结核等） 多重耐药株的出现 医院感染及条件致病菌感染的增加 一、临床常见病原体的检测方法 直接涂片显微镜检查（最简单、快速、直观） 病原微生物的分离培养与鉴定（确诊方法） 病原体特异性抗原或抗体检测（如：沙门氏菌属的血清血清凝集、肥达试验等） 分子生物学方法（如：基因探针技术和PCR技术） 其他方法（如：动物接种和细胞培养法-主要用于病毒等） 二、细菌的耐药性及耐药机制 耐药菌株的现状 耐药机制（包括遗传机制和理化机制） 遗传机制 ---固有耐药性（与生俱来） 生物基础是什么？（缺乏抗生素的作用位点；缺乏抗生素的转运机制；具有耐药基因；具有天然屏障） ---获得性耐药（后天获得） 主要途径有哪些？（自身突变和基因交换） 理化机制（重点） ---灭活酶或钝化酶的产生 ---药物作用靶位的改变 ---膜通透性改变 ---主动外排作用 ---存在抗生素抑制旁路 ---生物被膜的屏障作用 ---缺乏药物的转运机制 --举例—ESBLs,MRSA,Pae 抗菌药物 修饰酶 通透屏障 外排机制 靶位改变 其他 b-内酰胺类 + + + + 牵制机制 氯霉素 + + + + 红霉素 + + + + 林可霉素 + + + 氨基糖苷类 + + + 四环素 + + + 氟喹诺酮类 + + + 万古霉素 + + 磺胺类 + + 旁路途径 利福平 + + 表1 部分抗菌药物耐药的生化机制 三、常见耐药菌的监测 目的和意义 ---指导临床用药，预测抗菌治疗的效果，更合理地选择抗生素。 ---细菌耐药性监测和流行病学调查 ---耐药机制研究的重要手段 直接目的 耐药性检测的方法 ---纸片扩散法（定性检测） 如：最常用的KB法 ---稀释法（定量检测） 如：琼脂稀释法、微量肉汤稀释法 ---E-test法（定量检测） 此为结合稀释法和扩散法原理和特点而设计的一种简便、精确的测定MIC的方法。缺点：价格昂贵。 几个重要的概念 药物敏感性试验—简称药敏试验，是指检测细菌对抗菌药物的敏感性（或耐药性）的一种体外试验。 警告：体外试验结果与体内效果不一定一致。 MIC：最低抑菌浓度，即抑制细菌生长所需要的最低药物浓度。 MIC90：抑制90%试验菌株生长所需要的最低药物浓度。 MIC50：抑制50%试验菌株生长所需要的最低药物浓度。 敏感（susceptible,S) ---指用常规剂量的抗菌药物在体内能够达到的浓度可以治愈细菌引起的感染，禁忌证除外。 中介（intermediate,I) ---指抗菌药物对试验菌株的MIC值可接近血和组织中可达到的药物浓度，但抑菌速率低于敏感株。 耐药（resistant,R) ---指允许的最大剂量的抗菌药物在组织或血液中的浓度仍达不到抑菌目的。 临床常见耐药菌的监测 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的筛选测定 ---是目前导致医院感染的重要病原菌 ---定义和判读标准： 超广谱b-内酰胺酶（ESBL）检测 ---目前只用于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变形杆菌。 ---判读方法及标准（按CLSI-2010执行） ---ESBL阳性菌株的药敏结果处置 青霉素类、头孢菌素类和氨曲南都需报告为耐药，无论体外药敏结果是敏感还是耐药！ 高水平氨基糖苷类药物耐药（HLAR）和万古霉素耐药肠球菌的筛选 ---目的和意义：判断联合用药的可行性和效果 ---测试药物：GN、链霉素、万古霉素（必须用稀释法测MIC值） ---检测方法：纸片扩散法（临床实验室最常用）、稀释法（包括琼脂法和肉汤法）、E-test法 ---结果处置：若为耐药，则氨基糖苷类抗生素与作用于细胞壁合成药物（如：青霉素类和万古霉素）联合不出现协同。 耐青霉素肺炎链球菌（PRSP）的筛选测定 ---目的和意义：早期及时筛选出此类肺炎链球菌，指导临床合理用药。 ---筛选方法：1ug苯唑青霉素纸片筛选