手足口病病原的荧光PCR法检测及其临床特点.docVIP

手足口病病原的荧光PCR法检测及其临床特点 　　摘要：目的 探究手足口病病原的PCR检测方法及临床特点。方法 选取我市2012年1月～2013年1月确诊为手足口病的患儿40例作为研究对象，取其血液40例及大便标本40例。应用荧光PCR检测法分别对标本中肠道病毒筛选、柯萨奇病毒中A组16型（CVA16）、肠道71型病毒（EV71）进行鉴别，并归纳分析其临床表现。结果 40例大便标本检测显示，8例CVA16阳性，10例EV71阳性，20例EV-COM阳性。CVA16及EV71阳性的患儿在热程、体温、住院时间、尿素氮、血肌酐、AST、ALT比较，差异无统计学意义（P0.05）。结论 对疑似者发病早期的大便使用荧光PCR检测，可及时诊断出病原。 　　关键词：手足口病；荧光检测；临床特点 　　手足口病（HFMD）是学龄前儿童中常见的一种急性传染性疾病，属于我国法定的报告管理型丙类传染病。病情严重者会导致脑炎、神经源肺水肿、无菌性脑膜炎、心肌炎和急性迟缓麻痹等。手足口病的主要致病病毒是肠道71型病毒（EV71）和柯萨奇病毒中A组16型（CVA16）。部分患者在感染手足口病病毒后，病情进展迅速，患者的死亡速度快[1]。笔者特于2012年1月～2013年1月选取我市收集的80例血液、大便样本，应用PCR检测技术进行研究，取得较好的成效，现将结果报告如下。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 选取我市2012年1月～2013年1月收入确诊为HFMD的患儿40例作为研究对象，取其血液及大便标本共80例。手足口病的诊断参照我国卫生部2011年修订的手足口病的预防控制指南[2]。年龄1.1～13.1岁，平均（4.5±1.1），发病至入院时间0.6～8.1d，平均（4.1±0.7）d。其中，发热者40例，口腔溃疡者38例，手部皮疹者40例，足部皮疹者39例，臀部皮疹者13例。 　　1.2仪器、试剂和检测方法 　　1.2.1主要仪器及试剂 选择SLAN实时荧光定量PCR检测仪器、离心机、金属浴等。使用由江苏硕世生物科技有限公司提供的肠道病毒71型核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）、柯萨奇病毒A16型核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）。 　　1.2.2操作方法 所有患儿均在入院当日抽取4ml静脉血和10g大便标本，静脉血置放在无菌真空管中，分离血清后，大便灭菌后置入密闭盒中，两组标本均于零下20℃储存备用。对血清及大便标本进行RNA提取及扩增或，由经培训的专业人员严格按照相关试剂及仪器的使用说明书进行操作。 　　1.3观察指标 对患儿入院及出院时的肌红蛋白、肾功能、肌钙蛋白、肝功能及血常规等进行检测。 　　1.4统计学处理 数据的收集与处理均由我单位数据处理中心专门人员进行，保证数据真实性与科学性。初步数据录入EXCEL（2003版）进行逻辑校对与分析，得出清洁数据采用四方表格法进行统计学分析，分析结果以P0.05表示有统计学意义。 　　2结果 　　2.1血清标本检验结果 本组患儿PCR检测结果显示，40例血清标本中，未检出阳性病例。 　　2.2大便标本检验结果 40例大便标本PCR检测结果显示，CVA16阳性者8例，EV71阳性者10例，EV-COM阳性者20例。EV-COM阳性患儿大便标本的采集时间为发病4.2d左右，前3d采集标本中的阳性病例比例为80%；EV-COM阴性患儿大便标本的采集时间为发病6.2d左右，EV-COM阳性及阴性标本采集时间比较，差异具有统计学意义（t=2.2164，P=0.0384）。 　　2.3不同病原的致病患儿相关指标分析，见表1。 　　2.4不同病原的致病患儿相关指标分析，见表2。 　　3讨论 　　HFMD是常见的一种肠道疾病，容易在儿童中感染发展为重症，引起患儿死亡。其常见的病原有埃可病毒、柯萨奇病毒及EV71。传统检测HFMD病毒的方法是组织培养分离，但该方式具有一定程度的局限性，不适用于临床的常规检测[2]。 　　通过对40例患儿研究中的临床表现看，手足臀皮疹、发热和口腔溃疡仍然是HFMD的症状特征。研究中40例患儿血清中未检出阳性病毒，这可能与病毒血症的持续时间短或患儿血液内病毒水平较低相关；大便标本中的阳性病毒检出率达50%，与疱疹液和咽拭子中的检出率相近（60%）[3]。在20例通用型试剂盒的阳性检测中，CVA16及EV71阳性阳性感染分别为8例和10例，表明CVA16及EV71是HFMD的主要病原体，其它病毒的感染相对少见，如埃可病毒等。同时也说明，通用型试剂盒在HFMD病院的检测诊断中具有显著的实用性，可应用在病原学的筛查中[4]。研究中对CVA16及EV71感染患者进行对比后发现，两组患者的临床症状基本相同，其严重程度也无大的区别，本研究中的EV71病毒