内蒙古大学生物技术基因工程实验论文1.doc

分类号: Q78 编号: 本科生基因工程实验论文 指导教师：苏慧敏 学 生： 专 业： 生物技术 年 级： 2009级 2012年月日 ……………………………………………………………………………1 1 绪论…………………………………………………………………………2 2 材料与方法 ...2 2.1 材料2 2.1.1 菌株与质粒 ………………………………………………2 2.1.2主要试剂及其配制………………………………………… 2 2.1.2.1 试剂…………………………………………………2 2.1.2.2 试剂与培养基的配制………………………………2 2.1.1.3 主要仪器……………………………………………5 2.2 方法5 2.2.1纳豆激酶（NK)引物的设计 5 2.2.2 NK基因的PCR扩增及电泳检测 5 2.2.3 DH5a和BL21(DE3)感受态的制备 9 2.2.4 pMD19-T-NK的构建及转化和鉴定 10 2.2.5 pET-Trx及pMD19-T-NK的酶切与回收 11 2.2.6 pET-Trx-NK的构建及转化和检测 11 2.2.7 pET-Trx-NK的诱导表达及SDS检测 11 3 结果与分析 13 3.1 NK基因的PCR扩增 13 3.2.pMD19-T-NK的构建与鉴定 13 3.3 pET-Trx及pMD19-T-NK的酶切和回收 14 3.4 pET-Trx-NK的构建与检测 14 3.5 pET-Trx-NK的诱导表达与SDS检测 14 结论与讨论 15 参考文献 15 致谢与感想 16  纳豆激酶基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达pMD19-T克隆载体连接后转入DH5a菌中，扩增带有目的基因的质粒，然后筛选出重组子。对重组子运用限制性内切酶双酶切后得到纳豆激酶基因片段，将该基因片段插入表达载体PET-trx中，转入BL21表达宿主菌中，通过IPTG进行诱导，用SDS检测诱导产物纳豆激酶。 关键词：纳豆激酶，基因表达Constructing Expression Vector and Expressing NK in E.coli Author： Supervisor: Su Huiming ABSTRACT Nattokinase(NK) is a good natural protease thrombolytic substance. It is Gene length about for 800bp. This experiment through building Nattokinase gene expression vector, make it express in Escherichia coli. We acquired Nattokinase gene from clonened in PMD-18-T vector by PCR(Polymerase chain reaction), and obtained the 800bp of target DNA fragment .Then we connected it with PMD19-T vector and transferred it in DH5a bacteria , screened out recombinants. We got nattokinase gene fragment resulting from the recombinants which cut by Restriction endonucleaset , and inserted the gene fragment into expression vector PET-trx,. We transferred the PET-trx vector into BL21 (DE3) bacteria, Through the IPTG induced, NK gene expressed, using SDSdetection result of n