柑橘（福橘）健康植株叶、茎、根部位内生菌脂肪酸生物标记的测定.docVIP

柑橘（福橘）健康植株根、茎、叶部位内生菌脂肪酸生物标记的分布特性 郑雪芳、刘波*、阮传清、林营志、肖荣风、朱育菁、范国成、蔡子坚 （福建省农业科学院柑橘黄龙病研究中心） 摘 要：对柑橘（福橘）的根、茎、叶进行磷脂脂肪酸（PLFA）测定和分布特征分析。结果表明：从柑橘植株体内检测到大量的PLFA，其中指示细菌的16:0脂肪酸生物标记量最大，指示放线菌的10Me 17:0次之，指示真菌的18:3ω6c(6,9,12)生物标记量最小。福橘不同部位内生菌的分布量不同，表现为叶片内生菌分布量最大，其次是根，茎部最少的规律。福橘植株体内优势微生物种群为指示细菌的16:00、指示真菌的18:1 w5c和指示嗜热解氢杆菌18:00，其中生物标记16:00和18:1 w5c在福橘健叶分布量最大，生物标记18:00在福橘健根分布量最大。 图1 福橘健康植株 1.2柑橘内生菌脂肪酸生物标记分析方法 柑桔植株内生菌PLFA的提取步骤如下：称取10g柑桔植株不同部位（根、茎、叶）于研钵中，用液氮研磨成粉状，装入50mL离心管中，加入20 mL 0.2mol·L-1KOH甲醇溶液，充分混匀，100℃水浴10min（此过程为避免管内液体沸出，可先不盖离心管盖子，用保鲜膜封住管口）；加入3 mL 1.0 mol·L-1的醋酸溶液中和pH值，充分摇匀；加入10 mL正已烷2000r·min-1条件下 15min，将上层正己烷相转入干净玻璃试管中，吹干；加入0.6mL体积比为1:1的正已烷:甲基叔丁基醚溶液，充分溶解，转入GC小瓶，用于脂肪酸测定。 PLFA成份采用美国Agilent6890N型气相色谱仪在下述色谱条件下平行分析脂肪酸甲酯混合物标样和待检样本：色谱柱lμL，100:1，载气（H2）流速为2mL· min-1，尾吹气（N2）流速为 30mL·min-1。5℃ min-1的速率使柱温由170260℃；再以40℃ min-1的速率升温至310℃，保持90s。250℃，检测器温度为300℃，柱前压l0.00 psi(1psi= 6.895kPa)。脂肪酸成份分析采用微生物自动分析仪（Sherlock MIS美国MIDI公司生产）：系统根据各组分保留时间计算等链长(ECl)值确定目标组分的存在、采用峰面积归一化法计算各组分的相对含量。 2 结果与分析 2.1福橘健康植株脂肪酸测定脂肪酸生物标记个，脂肪酸生物标记脂肪酸生物标记脂肪酸生物标记不同的生物标记代表着不同类型的微生物，在的分布差异。生物标记分布在全部，称完全分布，如11:0 2OH；生物标记只分布在特定的内，称不完全分布如12:016:0 iso只分布在柑橘的叶片中。脂肪酸生物标记 Biomarkers 微生物类型 福橘健康植株 根 茎 叶 10:0 细菌 Bacteria in general 10574 0 0 11:00 细菌 Bacteria in general 0 0 6533 10:0 2OH 细菌 Bacteria in general 0 0 14967 12:1 at 11-12 假单胞杆菌 Pseudomonas sp. 0 0 73248 11:0 iso 3OH 细菌 Bacteria in general 0 9680 30327 12:0 细菌 Bacteria in general 95816 0 0 11:0 2OH 革兰氏阳性细菌 Gram-positive 4879 88535 371382 13:0 iso 革兰氏阴性细菌 Gram-negative bacteria 0 3790 26247 13:0 anteiso 细菌 Bacteria in general 24379 0 0 13:1 at 12-13 细菌 Bacteria in general 0 23864 196272 12:0 iso 3OH 细菌 Bacteria in general 3752 0 0 12:0 2OH 细菌 Bacteria in general 3903 0 0 12:1 3OH 细菌 Bacteria in general 38509 0 0 14:0 iso 细菌 Bacteria in general 1927 0 0 14:1 iso E 细菌 Bacteria in general 0 38163 24717 14:1 w5c 放线菌 Actinomycete 2386 5149 5537 14:00 革兰氏阳性细菌 Gram-positive bacteria 96057 25344 24653 15:1 iso G 革兰氏阳性细菌 Gram-positive bacteria 1318 0 49