GELEQ凝膠成像使用指南.doc

GEL EQ凝胶成像使用指南 打开主机电源与计算机电源. 点击凝胶成像软件,进入QUANTITY ONE操作界面. 在FILE菜单中,选择GEL EQ菜单,进入图像采集界面 点击LIVE/FOCUS菜单,采集图像.(根据被扫胶的要求, 在凝胶成像主机面板上选择UV/WHITE紫外光/白光).(如需使用透射白光,则把白光台电源打开,把白光台放在底板上,把胶放在白光台上.) 调节光圈大小,点击IRIS下OPEN/CLOSE;调节聚焦,点击FOCUSE下NEAR/FAR按钮;调节远近即大小,点击ZOOM下相应按钮,直到满意为止. 爆光时间一般选择自动AUTO EXPOSE即可. 若图像上有高亮红点,说明爆光过度,则须缩小光圈. 图像调好后,点击SAVE键保存.若需保存为其他格式,则在FILE菜单下选择导出,保存为JPEG/TIFF格式文件. 关于分析处理见Quantity One应用讲义 Quantity One应用讲义 本讲义介绍Quantity One的两个重要分析功能：定量分析和分子量确定。 Quantity One软件Help?Quick Guide快捷指南提示如何实现一个功能，如定量分析(Volumes Quick Guide)，电泳条带分析(Band Analysis)，差显分析(Differential Display Analysis)，克隆计数(Colony Counting Analysis)等。快捷指南下有1，2，3…步骤，根据提示完成。 定量分析功能 快捷指南Volumes Quick Guide，此功能能对任意所选区域进行定量分析,此分析可以报告2个结果：相对浓度和绝对浓度（如有浓度标准样品） 选择成像系统或打开已保存的文件(软件可以控制Bio-Rad所有的成像系统如GelDoc,ChemiDoc,VersaDoc,GS-800,FX,如不是Bio-Rad成像系统所摄取的图象，将图象保存为Tiff文件格式，软件也可进行分析处理) Zoom Box，缩放，对图象进行放大观察 Transform转化，调节图象的对比度黑白 Volume Rect Tool 矩形区域选择，如U1 Volume Free hand Tool自由画笔选择区域，可以勾勒出无规则形状,如U2 Volumn Contour Tool等高线勾勒区域，自动连接浓度浓度相同的点，如U3 上面3种方法选择需要定量的区域。 双击所选区域，出现如下窗口，定义样品类型，如未知样品Unkonwn(U1,U2…即待计算样品)，背景Background(B1,B2…，软件在算浓度时会将此区域的浓度自动扣除) 或标准样品Standard（Std1,Std2, 如果该样品是浓度标准样品，即定量标准，需在浓度concentration一栏输入该样品的浓度）。 Select Tool选择不同区域 Print Image打印图像 Volume Analysis Report 定量报告结果，打开出现如下窗口，选择要报告的参数，主要有2个参数Volume和Concentration。Volume为相对浓度，如有浓度标准样品（Std），软件可报告Concentration绝对浓度。 二．条带分析功能Band Analysis 介绍用此功能对泳道内的所有条带进行分子量确定，相对浓度分析 1，2，3同上 4，5，6确定泳道lane,并可对泳道进行各种调整（实际实验中泳道往往不是垂直的而出现各种变形。在软件的工具栏中有一Lane Tool图标，包含有更多泳道编辑工具。 7．Lane Background去除泳道背景，建议不做 8．Detect Band，检测泳道内的条带，打开出现如下窗口，一般可通过调节sensitivity灵敏度来调节检测出的条带，或通过人工编辑来增加/减少条带。打开工具栏中Band Tool条带编辑工具包可看到更多编辑工具（如上图） Standard输入分子量标准，软件自带有许多Bio-Rad的分子量标准，如你用的是自己的标准，进入New Standard建立新的分子量标准，软件可以选择标准单位是MW（蛋白质）还是BP（核酸）等（左下图）。在Protein-Standard对话框中输入分子量数值，完成后单击赋值图标（右下图），回到图象文件上单击标准样品的泳道，软件自动将所输的分子量数值和泳道内的条带一一对应。 Band Attribute条带属性，在完成第9步以后，软件已自动计算出了其他未知条带的分子量,打开band attribute选择要报告的参数，这里我们选择Molecular Weight，图象上可以看到所有条带的分子量（红颜色标记），标准分子量为蓝色标记。 M