FS-2熒光分光光度计波长模式使用指南.docx

测试模式波长扫描 波长扫描模式是用来测试发射，激发和同步波谱波长扫描的测试流程：在FluoroMaster Plus文件夹里点击 “Wave Scan”来打开波长扫描软件检查发射光栅运行完毕在工具栏里点击新建“”，将出现下面的窗口，输入文件名并点击保存创建新的实验对话框将显示如下。输入一个标题,客户和用户ID,然后单击OK。?信息窗口:输入简短的信息关于这个实验或样品。?Title:输入标题的实验。?Customer:客户的输入信息?User ID:应该设置用户ID来执行测量。将会显示下面的窗口设置测量条件? 点击打开后加载之前使用的测试条件方案? 保存当前测量设置,可以另存为? 使用当前测量设置作为默认的设置,保存所有参数为默认方法点击开始在测试期间如果荧光强度超过65000会出现警告：这种情况下，在工具栏，有一个图标，点击后可以阻止高荧光强度对PMT的伤害测试完成后将会显示下面的信息，并且点击“OK”光谱结果和数据都将会显示点击可以打印出数据测试设置在波扫描模式下,发射,兴奋,和同步光谱测量数据是可用的。 1．发射光谱的测量 测量发射光谱,在扫描模式下选择“Emission”GeneralData Mode（数据模式）按以下设置数据模式：- Fluorescence: 测量荧光频谱，当样品接触到激发光束的时候光谱被测量出来- Luminescence:测量发光光谱如生物发光,化学发光。样品没有接触激发光束时发光光谱被测量。- Phosphorescence: 磷光光谱测量。当磷光模式被选中时,接触时间(s)选项卡和磷光延迟(ms)选项就被创建了。 - Light Exposure Time(s) 计算样品接触到激发光的时间 - Phosphorescence Delay(ms) : 在激发快门关闭之后测试开始之前来延迟时间。在点击Start键,样品接触激发光的设置在发射开始波长和激发快门关闭。然后,在延迟的测量为设置时间,磷光强度测量。然后,测量磷光下一个波长以相同的顺序。b) Auto Zero 在起始波长处设置荧光强度为“0”c) Corrected Spectra 修正谱函数是用来补偿光谱的失真,可能是由于不同的反射,吸光系数、灵敏度 等系统的每个组件作为PMT、光栅、镜子、透镜等。 d) Start Delay (s) 设置延迟时间测试样品(单位:秒)。 e) Repeat Number 设置重复数字测量。 f) Repeat Interval Time (m) 设置重复测量之间的间隔时间当重复号码设置超过2(单位:分钟)。 g) PMT Voltage (Volt) 输入PMT电压从100到1000伏特。更高的PMT电压设置可以提高强度,但它可能减少PMT寿命。如果强度超过65000项,PMT可能损坏或PMT寿命可能减少。选择合适的PMT电压。h) Scan Speed (nm/min) 选择扫描速度:1、10、60、300、600、1200、2400、6000 纳米 /分钟,自动或用户定义的模式。随着扫描速度下降,信噪比率上升,但这需要更多的时间来测量。平均数量和发射间隔(nm)决心自动根据设置扫描速度。如果扫描速度设置“自动”,发射间隔设置1海里。如果扫描种子设置“用户定义”,发射间隔和平均数量根据需要设置。 i) Integration Time (ms) 进入PMT积分时间:0.02到1250ms。积分时间设置的越长强度越高,但它会降低PMT寿命。如果强度超过65000项,PMT可能损坏或PMT寿命可能减少。 输入适当的PMT积分时间。*扫描速度和积分时间组合 如果在“扫描速度”中选择“自动”,扫描时间间隔设置为1纳米。如果在“扫描速度”中选择“用户定义”,积分时间、平均数字,扫描时间间隔可以根据需要设置。小积分时间可能导致数据丢失，为了得到波长扫描模式和3 d扫描模式的精确数据,集成超过20 ms是必要的。 扫描速度取决于电脑和光谱的通信速率可以稍微有所不同。 j) Response Time (s) 确定数据处理速度得到测量光谱。在以下值中选择响应时间:0.02,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,4.0和8.0秒。 k) Average Number 在单一波长处设置平均时间。只有扫描速度设置为“用户自定义”,平均数字可以被设置为所需的。平均数量的增加,信噪比率会变得很高,但扫描速度变得缓慢。 l) EX Slit (nm) 选择狭缝宽度对励磁单色仪:0.5、1、2.5、5、10、20纳米。随着狭缝宽度减小,谱带宽度也减小,强度降低。每个狭缝宽度意味着FWHM (全宽半最大)的激发或发射光谱。 m) EM Slit (nm)同EX Slit n) EX Filter (nm)