院内感染监测采样.doc

医院感染监测采样 一、物体表面： 采样时间：根据采样目的选择采样时间，如进行常规物体表面监测，则选择消毒处理后进行采样；若是暴发流行时的环境微生物学检测，则尽可能对未处理的现场进行采样。 采样面积：常规检测时被采面积100cm2，取全部表面;≥ 100cm2,取100cm2。暴发流行时不受此限。 采样方法： 对于平面的物体，用5*5cm2大小的标准灭菌规格板（也可以用眼直接看大概5*5cm2），放在被检物体表面，用浸有含无菌生理盐水（吐温-801g，蛋白胨10g，氯化钠8.5g，蒸馏水1000ml配制而成，PH7.2-7.4，121℃压力蒸汽灭菌20min）的棉拭子1支，在规格板内横竖往返涂抹各5次，并随之转动棉拭子，连续采样1-4个规格板面积。将棉拭子折去手接触部分，放入装有10ml含相应中和剂（吐温-801g，蛋白胨10g，氯化钠8.5g，蒸馏水1000ml配制而成）的无菌洗脱液试管内，立即送检。 对于门把手，金属，玻璃等曲面的小型物体则采用棉拭子直接在物体表面按一定顺序涂抹采样。 细菌总数检测：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样本接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已经融化的45℃-48℃的营养琼脂15-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃+-1℃温箱培养48小时，计数菌落数。小型物体表面的结果计算，用CFU/件表示。 物体表面细菌总数（CFU/ cm2）=平皿上菌落平均数*采样液稀释倍数/采样面积（cm2） 注意事项： 采样的标本要有足够的样本数量且具有代表性。 采样时，棉拭子处于湿润状态（用无菌盐水浸湿），如处于饱和状态可将多余的采样液在采样管壁上挤压去除。禁止使用干棉拭子采样。 二、手 1.采样时间：常规检测在洗手后从事诊疗操作前；特殊监测随时采样。 2.监测频度：一般情况下每季度监测1次。当发生医院感染流行，高度怀疑或确定与医务人员手的污染有关时，应及时进行监测。 3．采样方法：被检人5指并拢，用浸有无菌盐水的棉拭子在双手指曲面从指跟到指端往返涂抹两次（1只手涂抹面积约30cm2），并随之转动棉拭子，剪去操作者手接触部分，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管中，立即送检。 4. 检测方法：将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.0ml待检样本接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已经融化的45℃-48℃的营养琼脂15-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃+-1℃温箱培养48小时，计数菌落数。 医务人员手细菌总数（CFU/ cm2）=平皿上菌落数*采样液稀释倍数/采样面积（cm2） 注意事项： （1）.对化学杀菌因子消毒的效果监测，采样液应为含经鉴定合格的中和剂的洗脱液。若对非化学因子消毒效果监测，则不必加中和剂。 （2）所采样本应及时送检，室温下存放不超过2小时；4℃冰箱存放不得超过4小时。 三、空气 1：采样时间：在消毒处理后，操作前进行采样。采样前应关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min进行采样。 2：采样方法：平板暴露法：（1）布点方法：室内面积30m2设4角及中央共5点，4角的布点位置距墙壁1m处，室内面积≤30 m2设内中外对角线3点，内外点距墙1m处。 采样方法：将普通营养琼脂平板（直径9cm）放在室内各采样点处，采样高度距地面1.5m，内外及四角距墙1m，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5min，盖好立即送检。 计算公式：细菌总数（CFU/ cm2）=50000N/AT A=平板面积（cm2） T=平板暴露于中的时间（mim） N=平均菌落数 平板暴露法简便经济，但只能采到10um左右的大粒子，且不能作精确定量。 四、使用中消毒剂浓度监测 1．采样时间：更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液，采样后1小时内检测。 2. 材料：无菌吸管（1ml，10ml）和试管，无菌平皿，含相应中和剂的磷酸盐缓冲液（PBS,0.03mol/L,PH7.2-7.4），营养琼脂培养基。 3. 采样方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml含相应中和剂的PBS中混匀。 4. 检测方法：用无菌吸管吸取中和采样液0.2ml，涂抹于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个平行样，一个平板置20℃培养7日，观察真菌生长。另一个置37℃温箱培养3日，计数菌落数。 消毒液染菌量（CFU/ml）=每个平板上的菌落数*50 5. 结果判断：（1）使用中消毒液细菌菌落总数应≤100CFU/ml，不得检出致病微生物。 （2）无菌器械保存液必须无菌生长。 （3）使用中皮肤粘膜消毒液染菌量≤10 CFU/ml 6. 常用消毒剂的中和剂及其浓度： 甲醛：亚硫酸