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分子生物学专题new.doc
2002年全国中学生生物奥赛教练员培训班——分子生物学专题
■ 分子生物学基础理论
DNA复制
基因转录
蛋白质生物合成
基因表达的调控
基因工程
■ 专题内容
(一)复制、转录、翻译
(二)基因表达调控
(三)基因工程
复制、转录、翻译
遗传信息以遗传密码的形式编码在DNA分子上,表现为特定的核苷酸顺序,并通过DNA复制由亲代传递给子代。在后代的生长发育中,遗传信息通过DNA转录成RNA,然后由RNA翻译成特定的蛋白质,通过蛋白质执行各种生命功能,将生命的遗传特征体现出来。
1.DNA复制
DNA复制是指以亲代DNA分子的两条链为模板合成各自的互补链,形成两个子代DNA分子的过程。复制的过程是半保留模式和不连续的。复制过程是由一系列酶和蛋白质参与的。
复制开始时,亲代双螺旋DNA链首先必须解开螺旋,成为两条独立的单链分子,以作模板之用,催化完成这步反应的主要是解螺旋酶,Rep蛋白帮助解开双螺旋。解开的两条单链随即被单链结合蛋白所覆盖,作用是阻止单链本身折叠配对形成双链DNA,并保护单链部分不被核酸酶降解。DNA复制过程中担任DNA合成的酶是DNA聚合酶,只能从 5′→3′的方向逐个连入核苷酸。因此只能利用3′→5′方向的模板链合成子链,合成方向为 5′→3′,称为前导链。由于亲代DNA双链中只有一条链的方向为3′→5′,故另一条链(5′→3′)的复制只能先合成多个小片段DNA(称为冈崎片段),然后连接成长的链,称为滞后链。合成冈崎片段之前需由引物合成酶先合成一小段RNA引物。在此引物3′-OH端由DNA聚合酶III沿5′→3′的方向催化合成小的冈崎片段。之后由DNA聚合酶I切除RNA引物,并填补修复缺口。最后由DNA连接酶将多个小片段DNA连接成长链。而3′→5′方向的模板链可以在一个引物上连续进行5′→3′方向的链合成。而模板链可以在一个引物上连续进行5′→3′方向的链合成。
DNA复制所需的酶和蛋白质
酶和蛋白质 作用 拓扑异构酶 帮助解开复制叉前后的超螺旋结构 DNA解螺旋酶 解开超螺旋 Rep蛋白 帮助解开双螺旋 引物合成酶 合成RNA引物 单链结合蛋白 稳定单连区 DNA聚事酶III 合成DNA DNA聚合酶I 消除引物,填满裂隙 DNA连接酶 连接DNA末端 2.基因转录及转录后加工
转录是以DNA为模板,在RNA聚合酶作用下合成RNA的过程,是遗传信息从DNA向RNA传递的过程,是遗传信息表达的第一步。转录单位是指RNA聚合酶作用的起始点与终止点之间的DNA顺序;启动子是DNA分子上可与RNA聚合酶特异性结合,而使转录开始的一段DNA序列;增强子是包括启动子上游与启动子重叠的一段DNA序列,使启动子发动转录的能力大大增强。转录终止信号使mRNA从转录复合物上释放出来而终止转录。
DNA指导的RNA聚合酶在RNA合成中起催化作用。可以识别DNA分子中起始区的启动子,使DNA部分双螺旋解开,解开长度为17bp,从而产生单链DNA模板,并选择正确的核糖核苷酸催化形成磷酸二酯健。能识别转录终止信号,并可与调节转录的活化蛋白或阻遏蛋白作用,从而对基因的表达起调控制作用。转录起始时,必须有一些蛋白质因子参与,称为转录因子,作用是帮助RNA聚合酶结合到启动子上。包括:TF2D、TF2A、TF2B、TF2H、TF2E、TF2H等。
转录起始时,RNA聚合酶识别结合启动子,并解除启动子区域双螺旋结构,解开的以链相当于17个碱基对,开始催化合成RNA。转录延长阶段,RNA聚合酶沿模板3′→5′方向移动,并按模板的碱基序列,配对加入四种核苷酸,进行RNA的聚合。RNA的合成方向沿着5′→3′方向进行。酶前面的DNA双螺旋不断解开,后面的DNA重新回复到双螺旋结构,同时RNA链也不断地从RNA-DNA杂交体中分离出来。转录终止时,RNA聚合酶停止作用,RNA合成终止。新生的RNA链释放,局部解开的DNA回复到双螺旋结构,酶从模板上释放出来。转录过程即告结束。
转录后加工:按照DNA模板转录生成的RNA链经过修饰、切除和拼接等反应,去除非编码序列,形成成熟的、具有功能的RNA分子,这一过程称为RNA转录后加工。原核生物的mRNA不需要修饰加工,在它的3′端尚未完成转录前,其5′端已与核糖体结合,开始蛋白质的合成,即转录与翻译偶联。真核生物的转录在细胞核内进行,而翻译过程在细胞质中进行,转录和翻译在时间和空间上是分开的。真核生物的mRNA在细胞核中合成后,还必须经过一系列的加工处理,才能到达细胞质中指导蛋白的合成。转录后加工包括:5′端加帽,即新合成的mRNA的5′端与第7位碳原子被甲基化了的鸟嘌呤核苷酸在酶的作用下相连的过程,有提供核糖体的识别位点和使mRNA避免受到磷酸酶和核酸酶的攻击等作用。3′端加多聚
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