2012生化技术专题试题.ppt

生化实验技术专题 目录 第一节 生物大分子物质的制备 生物大分子分离纯化的一般步骤和原则 调整硫酸铵溶液饱和度计算表 注意事项 宇佐美曲霉537酸性蛋白酶的纯化 第二节 几类重要的生化实验技术 一．层析技术（chromatography） 层析技术原理 层析法分类（按装置分类 ） 氨基酸分析仪图解 气液色谱图解（gas-liquid chromatigraphy） 高效液相层析（HPLC）图解 （high performance liquid chromatigraphy） 各类层析的原理和载体 几种主要沉淀方法比较 常用层析技术及应用 吸附层析（absorption chromatography） 分 配 层 析 （distribuption chromatography）  逆流分溶原理示意图 分子筛层析（gel-filtration chromatography） 分子筛层析原理示意图 分子筛层析与洗脱曲线 洗脱体积与相对分子质量的关系 离子交换层析（ion-change chromatography） 离子交换层析原理示意图 梯度混合器 常用的阳离子交换剂 常用的阴离子交换剂 亲和层析（affiuity chromatography） 亲和层析原理示意图 聚焦层析（Chromatofocusing） 几种主要层析方法比较 二 、 电泳技术 电泳的一般原理 电泳技术分类 常用电泳技术 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE） 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamidegel electrophoresis，PAGE） 不连续PAGE的浓缩效应 SDS 等电点聚焦（isoelectric focusing） 琼脂糖电泳 不同浓度琼脂糖凝胶分离DNA的范围 毛细管电泳 Capillary Electrophoresis，CE 毛细管电泳装置示意图 毛细管电泳检测技术的发展 毛细管电泳分离模式的发展 电泳技术的拓展 双向电泳图谱 连续型逆向色谱电泳 CACE 分离原理示意图  三、 离心技术 离心机结构示意图 沉降系数（sedimentation coefficient） 密度梯度离心法（density gradient） 密度梯度沉降平衡法在核酸研究中的应用 沉降速率法（ sedimentation velocity） 分析型超速离心机 沉降平衡法（ sedimentation eguilibrium ） 透 析（dialysis） 超过滤（ultrafiltration） 蛋白质、核酸的定性定量检测 连续型逆向色谱电泳 CACE 分离原理示意图  课程注意事项及考试安排 1实验分组按选课号排每20人为一小组，时间另行通知（关注研究生处网页），每组2个同学负责。、 在最后一次实验结束后一周内由各组负责人统一将实验报告交到授课老师处。 课程考试时间定于12月20日左右，具体时间请关注研究生处培养办网页通知。 课程成绩总分中期末考试成绩占60%，实验成绩占40%。 蛋白质混合物 配体 与配体结合的蛋白质 加入的可溶性配基 专一性结合蛋白质 没有结合的蛋白质 非专一性结合蛋白质 蛋白质浓度 洗脱体积 与配体专一性结合蛋白质 加入配基 基质 该法是在等电点聚焦方法基础上发展起来的，其分离纯化蛋白质的依据是等电点的差异和离子交换行为。蛋白质按其等电点在pH梯度环境中进行排列的过程叫做聚焦效应。 pH梯度的形成 由多缓冲剂和多缓冲交换剂形成 是聚焦效应的先决条件，如果一种蛋白质加到已形成pH梯度的层析柱上时,由于洗脱液的连续流动，蛋白质将迅速地 迁移到与它等电点相同的pH处。从此位置开始，该蛋白质将以缓慢的速度进行吸附、解吸附，直到在等电点pH时被洗出。在聚焦层析过程中,一种样品分次加入时，只要先加入者尚未洗出,并且有一定的时间进行聚焦,剩余样品还可以加到柱上,其聚焦过程都能顺利完成。 pH梯度溶液的形成示意图 蛋白质1（pI 7） 蛋白质2（pI 8） 流速 移动速率 层析时的聚焦效应示意图 1．电泳的一般原理 2. 电泳技术的类别 3、常用电泳技术 4、电泳技术的拓展 电泳是带电颗粒在电场作用下向着与其电荷相反的电极移动的现象 。许多生物分子都带有电荷，其电荷的多少取决于分子组成、性质及其所在介质的pH。如果混合物中各组分的结构组成不同，在某一pH溶液中，各组分所带电荷性质、电荷数量不同，加之其分子量不同，在同一电场的作用下，各组分泳动的方向和速度也各异，而达到分离鉴定各组分的目的。 垂直板电泳 毛细管电泳 水平板电泳 电泳支持物 滤纸 凝胶 薄