实验教学观察细胞的基本结构.doc

实验教学 第一单元第二章第二节 观察细胞的基本结构 济南一中 李 颖 实验原理 1．黑藻等藻类或藓类的叶片较薄而且透明，叶绿体显绿色因此可以不用染色直接在光学显微镜下。 2．细胞中的线粒体可以被詹纳斯绿B染液染成蓝绿色（线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态）。 材料器具 新鲜的金鱼藻叶片、水绵 替代黑藻 ，新鲜的鸡肝（同时选取口腔上皮细胞）；显微镜，盖玻片，载玻片，培养皿，滴管，消毒牙签；质量浓度为2mg/dl詹纳斯绿B染液，林格氏液（可直接购买瓶装生理盐水或自行配制）。 实验过程 一、观察线粒体 （一）活动程序 取材：取新鲜鸡肝边缘较薄的肝组织一小块（2～3mm3）。 清洗：放入盛有林格氏液的小培养皿内洗去血液 用镊子轻压 。 染色：用吸管吸去林格氏液，在小培养皿内加詹纳斯绿B染液，让组织块上表面露在染液外面，使细胞内线粒体的酶系可进行充分的氧化，这样才有利于保持染料的氧化状态，使线粒体着色。当组织块边缘染成篮色时即可，一般需要染30分钟。 获取游离肝细胞：染色后，将组织块移到载片上，用镊子将组织块拉碎，就会有一些细胞或细胞群从组织块脱离。将稍大的组织块去掉，使游离的细胞或细胞群留在载片上。 制作临时装片：加一滴林格氏液，盖上盖片，吸去多余水分。 显微镜观察：低倍镜观察细胞各部分结构，高倍镜观察线粒体形态和分布。 结果：肝细胞质中许多线粒体被染成蓝绿色，呈颗粒状。越新鲜的细胞（代谢旺盛的细胞）线粒体越多，染色效果越好。 （二）注意事项： 1.本实验为活体染色实验，所以鸡肝必须新鲜，短时间低温冷藏的组织也可以，但不可以冷冻保存。 2.拉碎细胞过程中不必剪得太碎，以免影响观察效果。 3.鸡肝染色时间比较长，可以在此过程中进行观察叶绿体实验。 4.由于鸡肝细胞本身有颜色，在一定程度上会影响染色及观察，因此可以用无色人口腔上皮细胞代替。用消毒牙签取细胞前应当漱口，以保证所获得的细胞清洁没有杂质干扰。 二、观察叶绿体 （一）活动程序 取材：选取新鲜色淡绿有弹性的叶片 制作临时装片： 显微镜观察：先用低倍镜找到叶片细胞，观察细胞的细胞壁、细胞质、液泡和细胞核等，然后换用高倍镜观察叶绿体的形态和分布。 结果：金鱼藻细胞叶绿体呈椭球形，向光处分布多，背光处分布少。水绵细胞叶绿体带状螺旋分布。 （二）注意事项： 1.北方城市中，金鱼藻容易获得（湖泊、溪流或者虫鸟市场都有），因此比观察黑藻更具有可行性。 2.本实验为活体实验，首先要选取淡绿色有弹性叶片，叶片深绿色的叶绿体太多造成重叠，不容易观察；无弹性叶片为衰老或者死叶片，叶绿体大多解体。装片始终要保持在有水的环境中以保持生物活性。 实验扩展：在观察叶绿体后可以观察叶绿体的运动。 提问：叶绿体在细胞质中运动方向如何？为什么会出现这种现象？ 小资料：林格氏液 林格氏液也称复方氯化钠,是因为林格除了含有氯化钠成分,还含钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、氯离子及乳酸根离子。 林格氏液配法： （1）氯化钠 9g （2）氯化钾　012g （3）氯化钙　024g （4）碳酸氢钠　02g （5）蒸馏水　1000ml 林格氏液比生理盐水成分完全，可代替生理盐水用以调节体液、电解质及酸碱平衡。在生理盐水中加入氯化钾及氯化钙，则为林格氏液。因为它是由英国生理学家“林格”所发明，所以称林格氏液，实际上就是通称的复方氯化钠注射液。 在林格氏溶液的基础上再加入乳酸钠，则成为乳酸钠林格注射液，也称哈特曼氏溶液，每100 ml含氯化钙0.02 g，氯化钾0.03 g，氯化钠0.6 g，乳酸钠0.31 g。乳酸钠林格则适用于酸中毒或有酸中毒倾向的脱水病例，所以手术室经常使用。