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含有一个来自于大肠杆菌的经过加工的LacZ基因（LacZ′），它编码β-半乳糖苷酶氨基端146个氨基酸 ，可以和β-半乳糖苷酶缺陷型的大肠杆菌实现基因内互补，即α—互补 ，恢复分解乳糖的能力。 X-gal也是β-半乳糖苷酶的一种底物，经降解后可生成溴氯吲哚，使大肠杆菌菌落呈蓝色。当无β-半乳糖苷酶时，X-gal不被分解，菌落呈白色。 当外源基因插入到pUC质粒的LacZ′基因内部，则LacZ′基因受到破坏，便不能再和缺陷型受体菌中生成有活性的β-半乳糖苷酶，因此，菌落呈白色。 反之，非重组体为蓝色菌落。 表达载体的必备条件 1.能自主复制 2.具有方便、灵活的克隆位点和筛择标记 3.具有能为 RNA聚合酶识别的强大启动子 4.启动子应可受诱导调控 5.具有强终止子 6.具有翻译起始信号 如何阅读质粒图谱 第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒） 第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。 第三步：看多克隆位点（MCS）。看其限制性酶切位点，决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 第四步：再看外源DNA插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。 第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号。 克隆载体必备条件 1.具有复制起点 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点 2.具有抗菌素抗性基因 3.具有若干限制酶单一识别位点 4.具有较小的相对分子质量和较高的拷贝数 穿梭质粒载体 是一类由人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活和复制的质粒载体。