HPLC-咖啡因.docVIP

实验题目： 教学目标： 1、了解的基本结构及操作步骤。 2、教学重点： 掌握混合物中组分含量的方法教学难点： 了解的基本结构及操作步骤仪器药品： LC-2010高效液相色谱仪；色谱柱VP-ODS（4.6mm×15cm）；微量注射器。甲醇（AR），二次蒸馏水；咖啡因（AR）。流动相：甲醇/水 教学方法： 讲授、演示教学时数： 学时 教学过程： 一、实验原理 图1 咖啡因的结构 咖啡因是弱碱性化合物，是一种温和的兴奋剂，多用于中枢神经系统兴奋的药物，临床上常用于各种复方制剂中，如健脑合剂、脑清片、去痛片等。还具有强心、利尿和抗病毒作用。在确定的条件下，有一定的保留时间，在相同的实验条件下，分别测定纯物质和样品各组分的保留值，将两者进行对比，就可确定。 式（1）中：Ci为样品浓度，μg/ml; Cs为标准品浓度，μg/ml； Ai为样品峰面积； As为标准品峰面积。 二、高效液相色谱的组成 高效液相色谱仪由贮液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理器。 三、仪器与试剂 1、仪器 LC-2010高效液相色谱仪；色谱柱VP-ODS（4.6mm×15cm）；微量注射器。 2、试剂 甲醇（AR），高纯水；咖啡因（AR）；流动相：甲醇：水 31.1：68.9。 四、实验步骤 1、按操作说明书使色谱仪正常运行，并将实验条件调节如下： 柱温：35℃；流动相流量：1.0 ml/min；紫外检测器波长：272 nm。 2、标准溶液配制：将咖啡因在110℃下烘干1h。准确称一定量，溶解于50ml的容量瓶中，再移取25ml于100ml容量瓶中，定容。 3、样品处理：称取干燥的并经研磨成细末的茶叶，用新沸的开水40ml冲泡，并加盖闷10 min。移去上层清液后，再次用开水冲泡，并加盖闷10 min。冷却后合并两次清液于100ml容量瓶中，并用水稀释至刻度。取20ml该溶液，用滤膜过滤器过滤后备用。 4、待基线平直后，分别注入标准溶液10.0μL，记下咖啡因保留时间。 5、注入样品溶液10.0μL，记下保留时间，重复两次。 6、实验结束时，按要求关好仪器。 五、结果处理 1、指出咖啡因在样品色谱图中的位置。 根据标准品在色谱图上的保留值，对样品中的咖啡因进行定性分析。 2、计算茶中咖啡因的浓度（μg/ml）。 根据标准品和样品的峰面积，可以计算样品的浓度，此浓度与每次实验的样品有关。 六、注意事项 1、若样品和标准溶液需保存，应置于冰箱中。 2、为获得良好的结果，标准和样品的进样量要严格保持一致。 3、实验完毕后，应依次用水和甲醇冲洗干净色谱柱。 七、思考题 1、根据咖啡因的结构式，咖啡因能用离子色谱法分析吗？为什么？ 2、如何对咖啡因进行定性和定量分析，方法有哪些？ 八、教学后记 仪器分析实验 教案