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组织化学染色
特殊染色在临床病理学中的应用
染色的意义和目的
用染料对组织切片进行处理,使组织中的不同成分被染上相应的颜色,产生不同的折射率,以利于光镜观察和分析。病理染色属于生物性染色的范畴。
应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显色剂,显示组织或细胞的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等,称特殊染色(Special staining) 。
特殊染色(special staining)
染料和染色的原理
一、染料的特点:
组织病理学染料是生物学染色剂
对所染组织成分具有亲和力
染色剂中同时具备发色团和助色团才具有染色功能
发色团是使染料显色的化学团(色原),一种染料由一个或多个发色团,染料颜色取决于发色团多少和强弱。
助色团指使色原产生电离成为盐类,对被染物产生亲和力的原子团
染料和染色的原理
二、染料的分类
染料的来源分类:天然和合成染料
化学反应分类:碱性染料、酸性染料、中性染料
用途分类:
细胞核染料:苏木素,核固红,结晶紫等
细胞质染料:伊红,酸性复红,苦味酸等
脂肪染料:油红O,苏丹III,苏丹IV
纤维结缔组织染料:苦味酸,亮绿等
染料和染色的原理
三、染料的原理
物理机制:
毛细管渗透作用:染色剂沿组织间微孔渗透到组织中。
吸收或溶解作用:组织吸收或溶解染料而着色,如脂肪染色
吸附作用:染料的色素粒子浸润组织中,因分子引力,色素粒子被吸附而染色
例如脂肪染色:
苏丹类染色剂在脂质中的溶解度>酒精中的溶解度
溶解于酒精的苏丹类染色剂与组织中的脂质接触时,染色剂就从溶液中“转移”到脂质中,从而使脂质着色。
染料和染色的原理
三、染料的原理
化学机制:
组织和细胞中含有碱性和酸性物质,分别与染料中的阳离子和阴离子结合。
如HE染色:细胞核主要由核酸构成,与碱性染料-苏木素结合,而胞浆主要由碱性物质构成,与酸性染料-伊红结合。
普通染色:又称常规染色,即指HE染色(haematoxylin and eosin HE)
特殊染色:除HE以外的所有染色,显示特定的组织结构和成分。
单一染色:用一种染料进行的染色,如甲苯胺蓝染幽门螺杆菌
多色染色:用两种以上染液染色的方法,如三色染色
对比染色:又称复染或衬染,先将某一成分或结构染色后,再用另一种染料染其他成分,如苏木素衬染细胞核
染色的常用术语
进行性染色:渐进性染色,采用低浓度的染液,使组织成分着色自浅入深,直到达到合适强度,
退行性染色:又称后退性染色,先使组织着色过度,再用某些溶液脱去多余染液,达到合适染色强度
媒染剂:具有促进染色能力,对染料和组织都有亲和力并与染料和组织结合在一起的试剂。如硫酸铝钾等
染色的常用术语
促染剂:促使染料着色,增强染色能力,但本身不参与染色反应,如乙酸
异染性染色:组织经过盐基性染料染色后,出现与染料不同的颜色
分化:指用某种溶液选择性脱去过深的着色,并使不应着色的组织细胞成分脱色的过程,HE染色时的盐酸酒精分化
蓝化作用(返蓝):苏木素在酸性条件下呈红色,碱性条件下呈蓝色,HE染色时在酸分化后,再用碱性水使核变蓝,称蓝化
染色的常用术语
按照染色方法分类
一般方法分类:常规染色,特殊染色等
按主要组织和细胞成分分类:结缔组织染色,肌组织染色,神经组织染色
按染色对象种类分类:切片染色法,组织块染色法,大体标本染色法
染色方法的分类
按发明者姓名命名:如Van. Gieson(VG)染色
按所有染料分类:如苏丹IV染色,锇酸染色
按所染组织分类:如网状纤维染色
其他分类:
染色方法的命名
选择适当的组织处理方法:包括固定液和切片的选择,如脂肪和酶类染色需冰冻切片
染色液的有效期和保存方式
染色液的浓度和pH值
染色时间的控制
染色前切片的预处理:如脱甲醛色素,脱汞盐固定液的汞结晶等
染色中易出现的问题和对策
注意特染的应用范围,如某种病变应用什么方法染色才能达到目的,一般根据HE切片所见,选择适当的特染方法。
必须掌握各种特殊染色的结果,避免导致错误的结论或严重的误诊,如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。
应做阳性切片作对照,保证染色结果的可靠性。
染色所用的器皿都必须清洗。
染色中易出现的问题和对策
常用染色方法和应用
结缔组织由细胞和细胞间的骨架成分构成,分为无定形的间质(如硫酸盐和非硫酸盐黏多糖)和定形或纤维型间质(如胶原纤维,弹力纤维。网状纤维)。各种纤维成分的识别有助于病理学的诊断和鉴别诊断。
结缔组织染色
网状纤维的特性
网状纤维是构成组织的网状支架
广泛分布于实质器官内,其中最丰富的区域是肝脏、脾脏、淋巴结、骨髓、基膜、血管等
形态学上为交织成网的纤细纤维
化学成分为
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