5 第四章 兽医生物制品生产的基本技术课件.ppt

第四章 兽医生物制品生产 的基本技术 第一节 菌种与毒种选育技术 生产用菌种和毒种是兽医生物制品生产的关键，也是生物制品质量的直接保证。 由于生物制品用途的不同，所选择的菌种和毒种也各异，有的致病力强、抗原性好的，有的则要求致病力弱或仅有感染性而无病害性，免疫原性高的菌（毒）种。 菌种和毒种筛选的基本原则是：根据所生产的制品的用途、使用方法、使用方式、生产过程和条件等因素，从细菌和病毒的安全性、免疫原性、遗传稳定性及生产实用性等方面，进行评价和筛选。 一、兽医生物制品菌（毒）种标准 1．生物学特性明显、历史清楚：菌种的形态、培养特征、生化特性及血清免疫学特性明显，易于鉴别；菌（毒）种人工感染动物引起稳定一致的临床症状和病理变化特征。原始细菌或病毒株的来源地区、动物品种和流行资料应清楚；分离鉴定资料完整；传代、保藏和生物学特性检查方法明确。 2．遗传学上相对纯一与稳定： 菌（毒）种是一个相对群体，在传代增殖过程中受不同因素的作用后会发生遗传性状的改变或分离,因此要求生物制品用菌（毒）的这种改变或分离越小越好。 菌（毒）种遗传性状的改变主要表现在形态特征、毒力和反应原性、免疫原性等方面。为提高或保持菌（毒）种纯一性和稳定性，应经常进行挑选，纯化或克隆化，例如羊痘鸡胚化毒种在经过羊体传代2~4代复壮和纯化后方能用于制造疫苗。 3．免疫原性与反应原性优良： 优良的免疫原性与反应原性是生物制品菌（毒）种标准的重要指标。通常也可通过浓缩、提纯或导入佐剂等方法提高制品的免疫效果。 优良的免疫原性物质能使免疫动物产生完善的免疫应答，从而获得坚强的免疫力。 反应原性高，即使微量抗原物质进入机体即能产生强烈的免疫反应，在血清学上会出现很高的特异性。 4．毒力应在规定范围以内： 用于制造弱毒疫苗的菌（毒）种，在保持良好免疫原性前提下，其毒力尽可能弱些； 用于制造抗血清、灭活疫苗和疫苗效力检测的菌毒种应为强毒力菌（毒）种，而且抗原性要尽量高。 强毒力细菌的毒性物质一般为细菌毒素，在未处理前的毒力极强，对动物不安全，所以必需对其致病力进行测定。如果用于制造灭活疫苗，在生产过程中必须注意彻底灭活，并加强疫苗的安全性检验。 二、强菌（毒）种选育 强菌（毒）种广泛用于诊断制品、抗病血清、灭活疫苗和疫苗制品的效力检验；用作人工培育弱毒株的原始毒种；及用于微生物学、免疫学及动物传染学等研究。 强菌（毒）种常自疾病流行地区的典型患病动物体内分离。在疾病流行初中期，以临床状和病理变化典型而又未经任何治疗的患病动物可分离到毒力强和抗原性良好的自然菌毒株，如我国的石门系猪瘟病毒和多杀性巴氏杆菌C44-1等。然后，用从各地分离的自然强菌（毒）株中筛选出符合标准的菌（毒）株，供生物制品制造与检验。 菌（毒）种的筛选内容 1．毒力测定：常用易感实验动物、本动物、鸡胚或易感细胞测定分离菌（毒）株MLD（最小致死量）、LD50（半数致死量）、CELD50（鸡胚半数致死量）、CEID50（鸡胚半数感染量）或TCID50（细胞半数感染量）。 2．抗原性测定： 菌（毒）株的抗原性包含刺激机体产生抗体及致敏淋巴细胞的免疫原性和抗原与抗体结合发生特异性反应的反应原性。 免疫原性，多采用对免疫动物用定量原强菌（毒）株菌（毒）液攻击测定，以保护率表示。无论致病力测定或抗原性测定，均应设阴阳性对照，否则无效。 反应原性，多采用血清学方法测定，以抗体滴度或效价表示； 3．稳定性测定： 对适应于培养基、鸡胚或易感细胞上增殖培养和传代的菌（毒）株的毒力（致病力）和抗原性还要进行稳定性测定，以证明其后代特性不变，才有使用价值，并参与筛选择优。 4．综合判定，冻干保存： 根据致病力、抗原性和稳定性测定结果，筛选出毒力强、抗原性好、性状稳定的菌（毒）株，经增殖后进行冻干保存。 冻干后的菌种于4℃保存，冻干的病毒种保存于-20℃以下，可保存多年。通常经鉴定的菌（毒）种批，按需分装后冻干保存，可使用多年。 冻干菌（毒）种一经动物传代，即应重新分离、鉴定和检测后方能供种子或种毒用。 三、弱毒菌（毒）种选育 从自然界筛选，或以人工改变野生型强毒株的遗传特性进行培育获得。无论自然弱毒株或人工培育弱毒株，均由于DNA上核苷酸碱基的改变，而导致遗传性状突变及毒力降低的结果。 弱菌（毒）株的重要特征是致病力极微弱或无致病力，免疫原性优良，能使免疫动物获得坚强的免疫力。 弱毒菌（毒）种主要用于弱毒活疫苗、部分诊断制品和抗血清的制造。 弱菌（毒）种的选育途径和常用方法。 （一）自然弱毒株的选育 又称自发突变毒株，在自然