Chapter7定量与系统适应性1详解.ppt

液相色谱基础 定量与系统适应性 目录 准度与精度 外标法定量 内标法定量 标准加入法定量 括号式程序 系统适应性 用HPLC定量 液相色谱定量的准确度 误差 E = O - T O∶观测到的值 T∶真值 测定结果的准度 色谱方法是相对定量方法,如不考虑损失及杂质干扰等因素,其结果同“标样”的准确程度密切相关 相关系数 其中X及Y分别代表不同方法的实验值及平均值 液相色谱定量的精密度 测量的精密度 精密度的衡量 测量精密度的计算 分析测试结果 基线修正 线性检测器响应 配置一系列已知浓度的标准样 外标法校正曲线 结果的计算 计算公式 特点 无需各组份都被检出、洗脱 需要标样 标样及样品测定的条件要一致 进样体积要准确 内标法校正曲线溶液的配制 配制一系列浓度的标样，其中加有内标样 内标法校正曲线 结果计算 计算公式 特点 无需各组份都被检出、洗脱 需要标样，需要内标物 结果与进样体积无关 内标物的选择 对内标物的要求 化学结构与待测组分相似(同系物、异构体) 在样品中不存在 不与样品中组份发生任何化学反应 保留值与待测组分接近 浓度（响应值）与待测组分相当 其色谱峰与其它色谱峰分离好 标准加入法+内标法定量 括号式程序 更多的括号式程序 校正曲线只有在建立这条曲线的浓度范围内有效，高或低于这些点都可能引起计算错误 吸收值与浓度 系统适应性测试 什么是系统适应性测试 HPLC 数据的精度与准度来自于一个性能良好的色谱系统。 系统适应性试验意味着检查整个系统是在可接受的限度内工作的。 系统适应性试验的基础 仪器、电子的、分析上的操作，以及样品组成了一个完整的系统，可以作为一个整体进行评估。系统适应性试验即是建立在这一概念上的。 系统适应性指南（USP，EP以及JP） United States Pharmacopeia / National Formulary《美国药典/国家处方集》（简称USP/NF）。最新版为USP31-NF26。 European Pharmacopoeia (Ph. Eur.) ，现已经出版到EP6.5。 日本药局方（The Japanese Pharmacopoeia）由日本药局方编集委员会编篡，由厚生省颁布执行。日本药典最新版是2001年出版的第十四改正版。 系统适应性参数 容量因子，k=（tr-t0）/t0 重现性 相对保留，α =k2/k1 分离度，Rs=(tr2-tr1)/(1/2)(w2+W1) 拖尾因子，T=Wx/2f 理论塔板数，N=16(tr/w)2 系统适应性参数与建议值 何时进行系统适应性试验 当需要确保结果的重现性以及色谱系统的性能指标时，进行系统适应性试验 在分析未知物之前或之后 在色谱条件改变之后 协助验证系统（整体验证） 系统的故障排除 系统适应性 分离 为了确保系统在指标内，记录分离标准的趋势，例如分离度，拖尾因子，理论塔板数 重现性 标样分析的总结，确保系统在特定的重现性指标内工作 系统适应性 系统适应性样品 主要物质以及副产物的混合物，用于测定系统适应性。 标准物质 已知浓度的样品 控制样 已知浓度的样品，被当做未知物进行测定，用于计算测定结果与实际值之间的偏差 系统适应性 系统适应性样品应该至少在一系列的样品测定前后运行 控制样应该贯穿整个样品序列，按照一定的间隔运行 自动系统适应性 如果使用一个含有以下内容的报告方法报告结果： RSD 棒图 需要监测的参数的综合统计表 使用RSD棒状图和综合统计表监测系统性能后，可以使您对系统精度和准度的可接受程度，以及系统是适用于运行未知样的这些内容非常有信心 限制 设置时需小心 不要比仪器的指标设置得更窄 误差下限（Lower error limit, LCL） 误差上限（Upper error limit, UCL） 目标值 警告下限（Lower warning limit） 警告上限（Upper warning limit） 综合图中的限制可以标记出不能接受的值 系统适应性报告1 系统适应性报告2 利用系统适用性检查系统重复性 重现性 使用系统适应性对色谱系统进行故障排除 系统适应性软件允许通过查看峰的信息对系统进行故障排除： 保留时间 分离度（Rs），美国药典分离度 容量因子（k’） 分离因子（选择性，α） 柱效（理论塔板数，N） 拖尾或对称因子 基线噪音与漂移 使用系统适应性对色谱系统进行故障排除 系统故障排除 总结 定量是基于色谱峰响应与待测物浓度存在一定关系的基础上的 不同的定量方式包括 外标法 内标法 标准加入法 括号式程序 系统适应性是为了确保色谱系统适用于分析。 练习