第11章3-其他类型HPLC色谱法-UPLC-制备.ppt

第十一章-3 其他类型高效液相色谱法 特 点 色谱柱填料一直向着更小颗粒，dp仅为1.7μm 高压，色谱仪输液泵提供的输出压力可达140 MPa 快速，常规高效液相色谱需要30 min完成的样品分析在超高效液相色谱仪上缩短为仅需5 min 高效，柱效达20 万块/m理论塔板数 基本原理 结果（一）比HPLC更高的分离度 结果（二）比HPLC更高的分析速度 柱长缩短会加快分离速度 颗粒度越小，最佳流速也越大，进而可以通过提高流速来进一步加快分离速度 结果（三）比HPLC更高的灵敏度 更高的柱效、更窄的色谱峰宽，因为色谱峰变得更窄，峰高也就更高了。因此，UPLC技术在改善分离度的同时亦可提高检测灵敏度 关键技术 新型的色谱填料及装填技术 耐压而且颗粒度分布范围很窄的1.7 μm颗粒填料 超高效液相色谱仪 泵：密封、高压动力 ，精度高 高速检测器：非常高的采样速度和非常小的时间常数；死体积要尽可能小；光学灵敏度 应 用 体内药物分析、中药分析、代谢组学分析及其它一些生化领域 先导化合物的筛选 蛋白质组学研究 天然产物的分析 第十一章-4 其他类型高效液相色谱法 与分析型HPLC比较 目的：制备一定量的纯化合物 制备高效液相色谱分离方法的建立 （一）制备型HPLC分离条件的选择 1．柱效（n） 色谱柱超载，但不能严重超载，否则柱效会类似于呈指数下降，其分离能力急剧下降甚至基本上没有什么分离能力 2．容量因子（k） 容量因子不宜过高，一般控制在1~5这个范围内就可以了，因为容量因子的增大是以时间和大量溶剂消耗为代价的 （一）制备型HPLC分离条件的选择 3．分离因子（α） 固定相 －分析型色谱柱中的填料最好与后面使用的制备型色谱柱的填料是同一型号的产品 流动相－目标物与其最邻近杂质达到尽可能大的分离度 （一）制备型HPLC分离条件的选择 4．样品的溶解度 需要将大剂量的样品溶解在有限量的流动相中 pH值或者离子强度 替代溶剂 加热样品并提高色谱柱的柱温 添加表面活性剂 （二）制备性分离设计 1．峰接触法 增加待分离样品的进样量，直至待分离组分的色谱峰与最邻近组分的色谱峰刚好接触为止 2. 峰重叠法 增大待分离样品的进样量，直至待分离组分的色谱峰与最邻近组分的色谱峰发生重叠 （三）制备规模的制备性分离 d1是分析柱的直径 d2是制备柱的直径 L1是分析型柱的长度 L2是制备柱的长度 制备高效液相色谱仪 高压输液泵 一般流量需要30 ml/min，甚至1 L/min 进样器 样品环管要细而长，而不是短而粗 色谱柱 内径大，柱长短 检测器 示差折光检测器和紫外检测器或两者串联 郑枫 中国药科大学药物分析教研室 药物色谱分析课程 宋敏 中国药科大学药物分析教研室 药物色谱分析课程 宋敏 中国药科大学药物分析教研室 药物色谱分析课程 超高效液相色谱法 Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC dp H dp n R 制备高效液相色谱法 Preparative High Performance Liquid Chromatography 非线性色谱 线性色谱 理论基础 流动相应具有挥发性 流动相的挥发性不重要 样品在流动相中的溶解度很重要 样品在流动相中的溶解度通常不重要 输液泵流量大于10 ml/min 输液泵一般流量为1 ml/min 柱填料7μm或更大 柱填料5μm或更小 柱内径1 cm ～ 10 cm或更大 柱内径1 mm ～ 5 mm 进样量尽可能大，以得到更多的纯品 进样量够检测即可 特点 分离、富集和纯化样品组分 获得样品的定性和定量信息 目的 制备型HPLC 分析型HPLC