改良低离子聚凝胺法促进剂实验操作规程.doc

改良低离子聚凝胺法促进剂实验操作规程 1、目的：减少交叉配血试验的假阳性。 2、适用范围：交叉配血、血型鉴定、抗体筛检血型血清学试验。 3、试剂来源：中山市生科试剂仪器有限公司 4、采集与处理： 4.1 脉采血3-4ml，并观察是否溶血、乳糜血，如有此现象应再留标本并做记录。 4.2 检查留样试管、标签、标号、姓名、血型是否齐全，如有遗漏应拒收。 4.3 将血标本试管放370C水浴中10分钟，离心。 1、? 标准操作： 1、主（次）管加入受（供）血者血清2滴，加供（受）血者4%红细胞盐水悬液1滴。 2、各管加LIM0.8ml，混匀，静置1分钟，各管加Promoter1滴，混匀，3000转/分离心15秒，倒出上清液（残留约0.1ml），扣摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液1滴与管底，轻摇，凝集1分钟内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集1分钟内不能被消除，即为阳性。 2、? 结论： 阳性表示受（供）血者血清中含供（受）者红细胞血型Ag相应的Ab（IgG、IgM），供受血者不相容，阴性表示供受血者相容。 3、? 注意事项： 8.1 操作者须严格按照操作说明进行试验，红细胞浓度、血清滴量、反应时间、离心速度等均可影响试验结果。 8.2 若为弱凝集结果，本试剂盒按下述试验操作方法，还可进一步提高试验灵敏度。试验操作方法如下： 8.2.1 检测管中加试验血清2滴，4%红细胞盐水悬液1滴。 8.2.2 加LIM0.8ml，混匀，静置1分钟，各管加Promoter2滴混匀，3000转/分离心15秒，倒出上清液（残留约01ml），扣摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液1滴于管底，轻摇，凝集1分钟内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集分钟内不能别消除，即为阳性。 8.3 检测标本应为非抗凝血，如标本中含抗凝成分的含量过高明显干扰凝集反应，可适当调加Promoter的滴量，以中和抗凝成分的干扰。 8.4 试验温度以20-300C为宜，若为寒冷凝集，370C水浴分钟，在此温下观察，凝集消失，说明冷凝集素存在。 8.5 肉眼直观判断的结果应确保与显微镜下观察结果一致，直观不能明确判断的可疑结果须镜检，镜下：阴性结果应该是单个RBC均匀分布，有RBC凝集状散在的即为若阳性。 8.6 试验质量检验：取自身血清与自身红细胞用本试剂盒试验方法作自身阴性对照试验，取IgG抗D血清与RhD（+）RBC用本试剂盒试验方法作阳性对照实验，对照实验符合，试剂有效。 8.7 疑难结果以抗人球蛋白实验（AGT）作终判断试验，试验操作参照经典AGT（在AGT中，加入本试剂盒中的LIM0.8ml 370C孵育时间可缩短至10分钟）。 8.8 本试剂盒适宜大多数血型抗体的检测，但对kell血型系统抗体（主要存在白种人群）检测效果较差，由于我国黄种人群中kell血型系统抗体阳性者罕见，因此适合在国内推广。可补充抗人球蛋白试验，以提高对kell血型系统抗体的检出率。 关键词：聚凝胺 交叉配血1.??目的：检出和鉴定意外抗体；红细胞血型抗原定型2.??原理：凝聚胺溶解后产生的阳离子中和红细胞表面的唾液酸使红细胞间距缩短，发生由IgG直接搭桥的可逆的非特异性凝集，当非特异性凝集回复时，只剩下由抗原抗体搭桥的特异性凝集。3.??适用范围：配血、免疫性抗体检查、红细胞血型鉴定、 特殊的研究4.??所需材料：聚凝胺试剂、定型血清、谱细胞、洁净试管、滴管、离心机5.??操作程序：（以交叉配血为例）5.1??以生理盐水洗涤受血者和献血者红细胞1—3次，配成3-5%的悬液。5.2??交叉配血试验：主侧：2滴患者血清加1滴供者3-5%的RBC悬液。次侧：2滴供者血清加1滴患者3-5%的RBC悬液。阳对：2滴抗-D血清加1滴RH（+）3-5%的RBC悬液。自身对照：2滴患者血清加1滴患者3-5%的RBC悬液。5.3??每只试管加600微升低离子液，混合放置1分。5.4??分别加2滴Polybrene应用液，混合放置15秒。5.5??离心3400转/分15秒，弃上清，控干。5.6??观察管底有无聚凝物，如果没有则需重做。5.7??每管各加2滴解聚液，轻轻混合10秒，观察结果并做记录。5.8??结果判定：10秒内若为Polybrene引起的聚合应该会散开，判为阴性。若为抗原抗体引起的凝聚则不会散开，判为阳性。6.??注意事项：6.1??可以用EDTA血浆代替血清6.2??加入解聚液后应该在3分钟之内观察结果6.3??解聚液不可多加，以免降低试验灵敏度。 血型 A1红细胞 B红细胞 O红细胞 A — + — B + — — O + + — AB — — — 注意事项： 8.1试管、滴管和玻