塞来昔布对嘌呤素氨基核苷诱导的足细胞凋亡影响的实验研究.pdf

江 苏 大 学 硕 士 论 文 摘 要 Cell)， 足细胞(Podo啪)即肾小球脏层上皮细胞(GlomerularⅥsceralEpithelial 是一种具有高度特异性且终级分化的细胞，不具有增殖特性。足细胞损伤、脱落或 凋亡是肾小球硬化起始和进展的主要原因，而介导足细胞凋亡的启动因子及发病机 其表达部位在肾小球皮质的致密斑、髓质问质细胞及亨氏襻升支粗段。有研究报道 肾病大鼠模型中足细胞COX-2的表达显著增强。已有动物实验表明特异性COX-2 抑制剂对许多慢性肾脏疾病有减轻蛋白尿，延缓肾损害进展的作用，但作用机制尚 素氨基核苷(Puromydn 探讨特异性COX．2抑制剂对足细胞保护作用的分子机制，为临床对慢性进行性。肾损 害的防治探索出新的治疗靶点。 方法 1．将体外培养的条件永生性小鼠足细胞复苏并传代培养，并用PA干预足细胞诱 导其凋亡，采用westemblot法分析COX-2在凋亡足细胞中的表达。为进一步研究特 异性COx．2抑制剂塞来昔布对PA诱导的足细胞凋亡的影响建立实验基础。 2．以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象，实验分为8组：正常对照组(CON)、 嘌呤霉素氨基核苷组(PA)、地塞米松组(DEX)、地塞米松+嘌呤霉素氨基核苷 和48h对体外培养的足细胞分别用M丌比色法和Hoechst 33258荧光染色法检测足细 胞活性和凋亡水平；用C嬲p硒e．3活性检测试剂盒检测凋亡过程中c嬲pa∞．3蛋白酶的 活性水平；用Westem blot技术检测凋亡过程中p53及COX．2水平。 结果 1．在33℃增殖状态下，足细胞呈鹅卵石状，在37℃分化状态下的足细胞呈分叉 状。在37℃分化14d后，用低血清培养液培养后，给予PA干预后，随时间延长，PA 诱导的足细胞凋亡逐渐增多，在24h及48h COx_2表达明显增加。 江 苏 大 学 硕 士 论 文 凋亡率在24h及48h比正常对照组升高，但较PA组明显下降(P0．05)。 组增殖活性在24h及48h比正常对照组下降，但较PA组明显升高(PO．05)。 4．各组c猫pase．3活性无明显差异(P0．05)。 干预后明显降低(P0．05)。 用LOS、CELE、DEX干预后COX-2表达水平有所减少(P0．05)。 结论 1．COX-2在凋亡足细胞中的表达呈时间依赖性。 2．塞来昔布可以抑制PA诱导的足细胞凋亡，p53参与了PA诱导的足细胞凋亡过 程，塞来昔布抑制PA诱导的足细胞凋亡的可能与足细胞所表达的COx．2水平有一定 相关性。 关键词：塞来昔布；足细胞；细胞凋亡；COX．2 Ⅱ 江 苏 大 学硕 士 论 文 Abstract ne Calledme a Visceral出omerularepimelialceⅡ，als0 podocyte，ishigllly dⅢerenti砷edcellwtlich a roleiIl the specilked觚dte珊inally playSmajor esta【blishing filtration thereforehaveliInited be iflost． 哲ome九1lar ballrier．Podocytes abili哆t0D印laced resllltof deta妇ent0fcellsfbmthe PodocytesiIl