去甲斑蝥素对淋管内皮细胞和淋巴管生成的抑制效应.pdf

摘要 摘要 (HumanDermal Endothelial Lymphatic Cells，HDLEC)的增殖、迁徙的抑制杀 伤作用和对体外HDLEC三维培养形成的淋巴管生成的抑制作用及其相关分子 机制，以寻找一种安全、有效、实用的“抗淋巴管生成制剂， 数有效浓度(IC50)和细胞毒作用；应用Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪、 划线法和倒置显微镜、透射电镜检测、观察NCTD对HDLEC增殖、迁移的抑 制、直接杀伤和诱导凋亡作用。②通过HDLEC三维培养，建立HDLEC体外模 拟的淋巴管生成模型，应用倒置显微镜观察NCTD对淋巴管生成的抑制、破坏 作用和对形态学的影响。③应用免疫细胞化学、Western．blot、实时荧光定量PCR 技术测定NCTD对HDLEC三维培养体外模拟淋巴管生成过程中淋巴管生成因 的“抗淋巴管生成”相关分子机制。 结果①MTT法测得不同浓度和时间的NCTD对HDLEC的增殖和生长有明 应用Hoechst染色+流式细胞分析、倒置显微镜、透射电镜以及划线法，可观察 到NCTD对HDLEC的形态和细胞的增殖具有显著的抑制和直接杀伤作用，并 能促进、诱导HDLEC凋亡，其作用随NCTD浓度／时间的增an／延长而加强 ③在HDLEC体外三维培养、成功建立HDLEC淋巴管生成模型的基础上，可观 察到由NCTD引起的淋巴管生成形态学改变，即NCTD对体外正在形成和已形 成的淋巴管生成有明显的抑制和破坏作用；④经免疫细胞化学、Western．blot检 mRNA、VEGF．DmRNA、VEGFR-3 mRNA表达均明显降低(氏0．01)。 摘要 结论①NCTD对人HDLEC的增殖、迁移具有显著的抑制、直接杀伤和诱 导凋亡作用，并呈浓度／时间效应关系。②NCTD对体外HDLEC三维培养正在 形成和已形成的淋巴管生成具有明显的抑制和破坏作用。③NCTD可在蛋白或基 巴管内皮细胞的增殖与迁移，诱导凋亡，下调淋巴管生成因子VEGF．C、VEGF．D 及其受体VEGFR-3的表达，阻抑VEGF．C、．D／VEGFR信号通道有关。 关键词：淋巴管内皮细胞，淋巴管生成，去甲斑蝥素，VEGFR-3抗体，抗 淋巴管生成，VEGF—C，VEGF-D，VEGFR-3 II Abstract ABSTRACT To the anddirect effectsofnorcantharidin Objectivestudyinhibitory killing and humandermal endothelialcells of (NCTD)onproliferationmigration lymphatic effectsofNCTDon (HDLEC)，theinhibitory from HDLEC structuresformedthethree-dimensionalcultureof cell capillary—like an lines／nvitroanditsrelatedmolecular astofred and mechanisms，SO safe，effective appliedanti—lymphangiogenesisagent． cellswereusedinthis m