全反式维甲酸提人结肠癌细胞系对奥沙利铂敏感性的实验研究.pdf

全反式维甲酸提高人结肠癌细胞系对奥沙利铂敏感性的实验研究 全反式维甲酸提高人结肠癌细胞系对奥沙利铂 敏感性的实验研究 专 业：外科学 博士研究生：吕会增 导 师：卫洪波教授 中文摘要 SW480／M5作用的实验研究 目的：筛选对LoVo细胞和SW480／M5细胞具有明确增殖抑制作用并适合与 retinoic 其他药物进行联合用药研究的全反式维甲酸(a11．transacid，ATRA)剂量 和作用时间；探讨此筛选ATRA分别对两种肿瘤细胞的作用和机理。 方法：MTT法检测不同浓度全反式维甲酸(ATRA)分别作用不同时间对两种 肿瘤细胞的增殖抑制率。倒置显微镜下观察各筛选浓度ATRA作用不同时间对 肿瘤细胞增殖的形态学改变。流式细胞仪检测：各筛选浓度ATRA作用不同时 问对肿瘤细胞周期的改变。流式细胞仪FITC．AnnexinV／PI双染法检测：筛选浓 结果：ATRA对两种细胞的增殖抑制率随药物浓度提高和作用时间延长而逐 可明显抑制肿瘤细胞增殖，对肿瘤细胞抑制率接近30％；倒置显微镜下可观察到 两种肿瘤细胞发生明显分化的形态学改变。l、2、4、8p．m01．L。ATRA分别作用 作用LoVo细胞8h不改变肿瘤细胞周期；其作用12h，细胞Gl期比例增加；24h 全反式维甲酸提高人结肠癌细胞系对奥沙利铂敏感性的实验研究 后伴S期比例降低；作用48或72h后，尚伴G2／M期细胞比例降低；且 l 而2、49m01．Lo 一步增高；其作用72h，Gl期比例进一步’卜降，尚伴G2／M期比例明显增加。 89m01．L．1 率明显增加；89m01．L．1 发生凋亡，但对肿瘤细胞凋亡率明显无统计学差异。 l 细胞在S一或(和G2／M)期并诱导细胞分化和凋亡，抑制肿瘤细胞增殖。 l 联合其他药物24h，可分别做为对两种肿瘤细胞进行联合用药研究的基础。 作用的实验研究 目的：探讨奥沙利铂(L．OHP)对人结肠癌淋巴结转移细胞LoVo和定向肝 转移细胞SW480／M5作用24h的效果和机理。 方法：MTT法检测不同剂量奥沙利铂(L．OHP)分别作用24h对两种肿瘤 细胞的抑制率。倒置显微镜下观察G150浓度L．OHP作用24h对两种肿瘤细胞的 形态学改变。流式细胞仪检测：两种肿瘤细胞自然对数增殖期的细胞周期情况； 两种细胞的凋亡率及差异。原子光谱吸收仪(石墨炉法)检测G150浓度L．OHP 分别作用两种肿瘤细胞4、8、24h后，肿瘤细胞DNA的含铂(n)量及差异。 结果：不同剂量L—OHP作用24h对LoV0细胞的抑制率随药物浓度的提高 cell net 而增加，其G150(GI，inhibitgrowthby％)浓度为6．5mg．L一；对SW480／M5 II 全反式维甲酸提高人纬肠癌细胞系对奥沙利铂敏感性的实验研究 细胞抑制率自8mg．LJ开始，随药物浓度提高而增加，其Gls0浓度为58．0mg．L-‘； 倒置显微镜卜．可见两种肿瘤细胞明显受损及死亡的形态学表现。不同剂量L．OHP 的细胞周期与LoVo细胞比较：Gl期比例降低，G2／M期比例增加。L—OHP均降 低两种肿瘤细胞的Gl期比例而升高S期比例；其中L．OHP升高LoVo细胞的S L．OHP均可诱导两种肿瘤细胞发牛早期凋亡；且G150L．OHP诱导的凋亡率较 率与SW480／M5 的能力较SW480／M5细胞明显增强。 结论：L．OHP作用24h对两种肿瘤细胞的增殖抑制作用呈量效依赖；而对 两种肿瘤细胞含Pt量呈时效依赖。LoVo细胞对L．OHP的药物敏感性明显高于 细胞凋亡。LoVo细胞DNA交联Pt的能力明显强于SW480／M5细胞。 敏感性作用的实验研究 物敏感性的作用和机理。 同时间后联合L．OHP作用24h对肿瘤细胞的抑制率；金正均法判断两药联合应 用效果。倒置显微镜观察两药联用对肿瘤细胞的形态学改变。流式细胞仪检测： 瘤细胞的细胞周期影响；流式细胞仪FITC．Anne