全基因组筛选胰癌化疗耐药基因——探索化疗耐药与肿瘤干细胞的相关性.pdf

中文摘要 目的全基因组内筛选胰腺癌健择化疗耐药的相关基因，探索化疗耐药与肿瘤干 细胞的相关性。方法通过在人胰腺癌细胞株PANC．1中建立Tet-off可调控的 piggyBac转座系统，构建PANC．1细胞株的全基因组突变文库，进而在其中筛选 具有特殊耐药性或是肿瘤干细胞特性的细胞亚群。 结果通过向PANC．1细胞 座系统，初步构建了PANC．1细胞株全基因组突变文库。同时，初步确立了利用 软琼脂培养筛选具特殊耐药性的细胞亚群以及利用悬滴培养筛选具肿瘤干细胞 特性的细胞亚群的方法学基础。 结论在PANC．1细胞株内可以建立一个可高 水平表达并受到灵敏调控的Tet-off基因表达调控系统。通过进一步引入受Te 台。通过软琼脂培养方法可以筛选特殊耐药的细胞亚群，通过悬滴培养方法可以 筛选肿瘤干细胞特性的细胞亚群。因此，以现已搭建的平台为基础，可筛选得到 具特殊耐药性或肿瘤干细胞特性的细胞亚群，进而对相关基因进行鉴定和功能验 —证。 关键词 化疗耐药肿瘤干细胞胰腺癌 Abstract ectiveTo screenforthe lociin genome-wide gemcitabine-resistance obj pancreatic to theroleofthecancerstemcellinchemoresistance． CanCer,and investigate MethodEstablishedaTet-off inducible inPANC-1 piggyBactransposonsystem cell stemcellculture line；investigatedhangingdrop system，generatedgenome-wide librariesofPANC-1cellsandearriedout of mutagenesis preliminaryscreening withCanCerstem gemcitabine-resistantsubpopulations cell Three properties．Result wereobtainedwithstableand inducibleTet—off clones，JAl，LC5，UB3 highly system， transfectionofthe intoPANC一1cellline．A by pTet-offplasmid mutagenesislibrary wasestablished aTet-off into byintroducingregulatedpiggyBac transposonsystem oneoftheclones of JAl，and preliminaryscreening cancer with stemcel